Mis on fluorestsentsmikroskoobi erilised konstruktsioonikomponendid?
Värvifiltri plokk on fluorestsentsmikroskoobi oluline osa ja selle põhikomponendid koosnevad esimesest ergastava valguse barjäärifiltrist, teisest emissioonivalguse tõkkefiltrist ja kiirt jagavast peeglist. Erinevate tootjate värvifiltrite mudelid ja nimed on sageli ebaühtlased.
1. Ergastusvalguse filter ja emissioonivalguse filter: Valgusallika ja fluorestseeruva pigmendi omaduste põhjal valitakse tavaliselt järgmised kolm sobitustüüpi, et saada ergastusvalgust teatud lainepikkuse vahemikus ja võimaldada prooviga ergastatud fluorestsentsil läbida ja jõuda pildistamiseks okulaarini.
UV-ergastus: Ergastusvalguse filter võimaldab UV-valgust läbida ja takistada nähtava valguse läbimist laiusega üle 400 nm. Vastav emissioonivalguse filter laseb sinisel valgusel läbi ja valgus vaateväljas paistab sinine, näiteks DAPI värvimisel.
Sinise valguse ergastus: Ergastusvalguse filter võib lubada sinisel valgusel läbida ja blokeerida teiste lainepikkuste valgust. Vastav emissioonivalguse filter laseb läbi rohelise valguse, näiteks GFP värvimismarkerid.
Rohelise valguse ergastus: Ergastusvalguse filter laseb läbi rohelise valguse ja blokeerib teiste lainepikkuste valguse. Vastav emissioonivalguse filter laseb tavaliselt läbi punase valguse, näiteks rodamiini värvimine.
2. Poolläbipaistev ja poolpeegeldav värvifilter: selle ülesanne on täielikult blokeerida ergastava valguse läbimine ja seda peegeldada; Ja kiirgavad valgust vastavas lainepikkuste vahemikus. Selle mudel vastab ergastusvalguse filtrile ja emissioonivalguse filtrile.
(2) Objektiiv ja okulaar
Kasutada saab erinevaid objektiive, kuid kõige parem on valida lisatud skaala ja kromaatilise aberratsiooni vähendamisega läätsed, kuna nende isefluorestsents on äärmiselt madal ja nende valguse läbilaskvus (lainepikkuse vahemik) on fluorestsentsi jaoks sobiv. Kuna kujutise fluorestsentsi heledus mikroskoobiväljas on otseselt proportsionaalne objektiivi ava suhte ruuduga ja pöördvõrdeline selle suurendusega, tuleks fluorestsentspiltide heleduse parandamiseks kasutada suurema avasuhtega objektiivi. Eriti ebapiisava fluorestsentsiga proovide puhul tuleks kasutada suure avaarvu ja suure valguse läbilaskvusega objektiivi koos väikseima võimaliku suurendusega okulaariga.
(3) Muud optilised seadmed
Peegli peegeldav kiht on tavaliselt kaetud alumiiniumiga, kuna alumiinium neelab vähem ultraviolett- ja nähtavat valgust sinises lillas piirkonnas, peegeldades üle 90% (samas kui hõbeda peegelduvus on vaid 70%). Üldiselt kasutatakse lamedaid peegleid. Spetsiaalselt fluorestsentsmikroskoopide jaoks loodud ja toodetud teravustamislääts on valmistatud kvartsklaasist või muust ultraviolettvalgust läbivast klaasist. Lisaks läbilaskva valgusallika funktsioonile sobib langeva valguse seade paremini läbipaistmatute ja poolläbipaistvate proovide, näiteks paksude plaatide, filtrimembraanide, bakterikolooniate, koekultuuride ja muude proovide otseseks vaatlemiseks. Viimastel aastatel on välja töötatud palju uut tüüpi fluorestsentsmikroskoope, kasutades langeva valguse seadet, mida nimetatakse langeva valguse fluorestsentsmikroskoopiks.
(4) Valgusallikas
Tänapäeval kasutatakse valgusallikatena tavaliselt 50 või 100 W kõrgsurveelavhõbelampe. Töötamise ajal toimub tühjenemine kahe elektroodi vahel, mille tulemusena elavhõbe aurustub ja kera sees rõhk tõuseb kiiresti (see protsess kestab tavaliselt umbes 5-15 minutit). Selle protsessi käigus kiirgatakse valguskvante ning eralduva valguse lainepikkus on piisav erinevate fluorestseeruvate ainete ergastamiseks. Seetõttu kasutatakse seda laialdaselt fluorestsentsmikroskoopides.
Elavhõbelampide kasutusiga on suhteliselt lühike, tavaliselt 200 tundi. Vastuseks sellele kasutusea piirangule on viimastel aastatel laialdaselt kasutatud uut tüüpi fluorestsentsvalgusallikat X-Cite, millel on ülipikk pirni kasutusiga 2000 tundi ja paindlik kasutus - eelsoojendus puudub, kasutusvalmis.
