Fluorestsentsmikroskoopide põhimõtted ja struktuuriomadused
Fluorestsentsmikroskoop kasutab ülitõhusat punktvalgusallikat, et kiirata teatud lainepikkusega valgust (nt ultraviolettvalgus 3650 või lillakassinine valgus 4200) läbi värvifiltrisüsteemi ergastusvalgusena, mis ergastab proovis olevaid fluorestseeruvaid aineid, et kiirgaks erinevat värvi fluorestsentsi, ning jälgib seejärel läbi objektiivi objektiivi ja okulaari suurenduse. Sel viisil on seda isegi nõrga fluorestsentsi korral tugeval taustal lihtne ära tunda ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri, funktsiooni ja keemilise koostise uurimiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur koosneb tavalisest optilisest mikroskoobist ja mõnedest tarvikutest, nagu fluorestseeruv valgusallikas, ergastusfilter, kahevärviline valgusvihu jaotur ja blokeeriv filter. Luminofoorvalgusallikas - kasutatakse tavaliselt ultra-kõrgsurve elavhõbedalampe (50–200 W), mis võivad kiirata erineva lainepikkusega valgust, kuid igal fluorestseeruval ainel on ergastusvalguse lainepikkus, mis tekitab kõige tugevama fluorestsentsi. Seetõttu tuleb lisada ergastusfiltrid (tavaliselt ultraviolett-, lillad, sinised ja rohelised ergastusfiltrid), et võimaldada ainult teatud lainepikkusega ergastusvalgust läbida ja katsekeha kiiritada, neelates samal ajal kogu muu valguse. Pärast ergastusvalgusega kiiritamist kiirgab iga aine väga lühikese aja jooksul nähtavat fluorestsentsi, mille lainepikkus on pikem kui kiirguse lainepikkus. Fluorestsentsil on spetsiifilisus ja see on üldiselt nõrgem kui ergastusvalgus. Spetsiifilise fluorestsentsi jälgimiseks tuleb objektiivi taha lisada blokeeriv (või summutav) filter.
Selle funktsioonid on kahesugused: esiteks neelavad ja blokeerivad ergastava valguse okulaari sisenemist, et vältida fluorestsentsi häirimist ja silmade kahjustamist; teiseks, et valida ja lasta läbida spetsiifilist fluorestsentsi, millel on spetsiifiline fluorestseeruv värv. Kombinatsioonis tuleb kasutada kahte tüüpi filtreid.
