Bioloogiliste proovide ettevalmistamine ja vaatlemine elektronmikroskoopide jaoks
Mikroskoobi eraldusvõime sõltub kasutatava valguse lainepikkusest. 1933. aastal ilmunud elektronmikroskoop saavutas optilise mikroskoobiga võrreldes oluliselt suurema eraldusvõime tänu nähtava valguse lainepikkusega tunduvalt lühemate elektronkiirte kasutamisele valgusallikatena. Erinevad valgusallikad määravad ka mitmeid erinevusi elektronmikroskoopide ja optiliste mikroskoopide vahel.
Tuginedes elektronkiire kujutise põhimõtete erinevustele ja viisidele, kuidas need proovidele toimivad, on tänapäevased elektronmikroskoobid arenenud mitut tüüpi. Praegu on kõige sagedamini kasutatavad ülekandeelektronmikroskoopid ja skaneerivad elektronmikroskoobid. Esimesel on kogusuurendus, mis võib varieeruda vahemikus 1000-10000000 korda, samas kui teisel on kogusuurendus, mis võib varieeruda vahemikus 20-300000 korda. See katse tutvustab peamiselt kahte tüüpi mikroskoobiproovide valmistamist, transmissioonelektronmikroskoopiat ja skaneerivat elektronmikroskoopiat.
2, seadmed
1. Escherichia coli tüvi on kaldu.
2. Lahus või reaktiiv: pentüülatsetaat, kontsentreeritud väävelhape, veevaba etanool, steriilne vesi, 2% naatriumfosfotungstaadi (pH 6,5-8,0) vesilahus, 0,3% polüvinüülformaldehüüdi (lahustunud kloroformis) lahus, tsütokroomatseet2,3 ammooniumatsetaat c.,3 ammooniumatsetaat c.,3
3. Instrumentide või muude tööriistade hulka kuuluvad tavalised optilised mikroskoobid, vaskvõrgud, portselanlehtrid, keeduklaasid, Petri tassid, steriilsed tilgutajad, steriilsed pintsetid, tihvtid, klaasklaasid, loendusplaadid, vaakumkatmismasinad, kriitiliste punktide kuivatid jne.
3, Toimingu sammud
(1) Proovide ettevalmistamine ja vaatlemine ülekandeelektronmikroskoopia jaoks
1. Metallvõrgu töötlemine
Optilise mikroskoobi proov asetatakse vaatluseks slaidile. Kuid ülekandepeeglis, kuna elektronid ei pääse läbi klaaslehe, saab võrkmaterjali kasutada ainult kandjana, mida tavaliselt nimetatakse kandevõrguks. Kandurvõrku saab erinevate materjalide ja kuju tõttu jagada erinevateks spetsifikatsioonideks, mille hulgas kasutatakse tavaliselt 200-400 võrgusilma (avade arv) vaskvõrku. Vaskvõrku tuleks enne kasutamist töödelda, et eemaldada mustus ja hoida see puhtana, vastasel juhul mõjutab see tugikile kvaliteeti ja näidiste fotode selgust. Selles katses kasutatud 400-silmalist vaskvõrku saab töödelda järgmisel meetodil: esmalt leotage ja ujutage pentüülatsetaadiga paar tundi, seejärel loputage mitu korda destilleeritud veega ning lõpuks kastke ja ujutage vaskvõrk veevabas etanoolis dehüdratsiooniks. Kui vaskvõrk ei ole ka pärast ülaltoodud meetodeid puhas, võib seda leotada lahjendatud kontsentreeritud väävelhappes (1:1) 1-2 minutit või keeta paar minutit 1% NaOH lahuses, loputada mitu korda destilleeritud veega ja seejärel dehüdreerida veevabas etanoolis hilisemaks kasutamiseks.
