Fluorestsentsmikroskoobi kasutusjuhised ja ettevaatusabinõud
Fluorestsentsmikroskoobi all vaadeldud fluorestsentskujutistel on nii morfoloogilised omadused kui ka fluorestsentsi värvus ja heledus. Tulemuste igakülgseks hindamiseks tuleb mõlemad tegurid kombineerida. Tulemuste salvestamine tugineb subjektiivsetele näitajatele, mis põhinevad operaatorite visuaalsel vaatlusel, mis on rutiinse kvalitatiivse vaatluse jaoks üldiselt usaldusväärne. Tehnoloogia arenguga kasutatakse dokumenteerimiseks ja hindamiseks üha enam objektiivseid instrumente, nagu mikrospektrofotomeetreid ja pildianalüsaatoreid. Sellegipoolest vajavad nende vahenditega saadud tulemused endiselt subjektiivset tõlgendamist.
Fluorestsentsmikroskoobiga pildistamine on fluorestsentskujutiste dokumenteerimiseks hädavajalik. Kuna fluorestsents kaob kiiresti, tuleb tulemused kiiresti pildistada. Protseduur on suures osas sama, mis tavalisel fotomikrograafial, välja arvatud see, et vaja on ASA 200 või kõrgemaid kiireid fotofilme. Ultraviolettvalgus põhjustab tugevat fluorestsentsi fotopleegitamist. Näiteks FITC-märgisega proovid kaotavad pärast 30-sekundilist UV-kiirgust 50% oma fluorestsentsi heledusest. Seetõttu ei suuda aeglane säritus fluorestsentspilte jäädvustada. Enamik teadusliku kvaliteediga fluorestsentsmikroskoope on varustatud poolautomaatsete või täisautomaatsete fotomikrograafiasüsteemidega.
Ettevaatusabinõud
① Töötage rangelt vastavalt fluorestsentsmikroskoobi tootja juhendile; ärge muutke tööprotseduure meelevaldselt. ② Vaatlusi tuleks läbi viia pimedas ruumis. Pärast pimedasse ruumi sisenemist lülitage toide sisse ja süütage kõrgsurve elavhõbedalamp 5–15 minutiks. Alustage proovide vaatlemist alles pärast seda, kui valgusallikas on stabiliseerunud ja teie silmad on pimedusega täielikult kohanenud.
③ Kaitske silmi ultraviolettkiirguse eest. Valgusallika reguleerimisel kandke kaitseprille.
④ Iga vaatlusseanss on soovitatav kesta 1–2 tundi. Ülikõrgsurve elavhõbedalambi valgustugevus väheneb järk-järgult 90 minuti pärast ja fluorestsents nõrgeneb vastavalt. Proovide fluorestsents kaob märgatavalt ka pärast 3–5-minutilist UV-kiirgust. Maksimaalne pidev vaatlusaeg ei tohi ületada 2–3 tundi.
⑤ Fluorestsentsmikroskoobi valgusallika kasutusiga on piiratud. Aja säästmiseks ja lambi eluea pikendamiseks uurige proove partiidena. Kasutage kuumas keskkonnas soojuse hajutamiseks elektriventilaatorit. Registreerige tööaeg algusest peale pärast lambi vahetamist. Kui lamp kustub, oodake enne uuesti süütamist, kuni see täielikult jahtub. Vältige lambi sagedast taaskäivitamist.
⑥ Jälgige määrdunud proove kohe pärast värvimist, kuna fluorestsents aja jooksul tuhmub. Proove saab hoida 4 kraadi juures polüetüleenist kilekottides, et aeglustada fluorestsentsi lagunemist ja vältida paigalduskandja aurustumist.
⑦ Fluorestsentsi intensiivsuse hindamisstandard: üldiselt kasutatakse nelja klassi: "-": fluorestsents puudub või on tuvastatav ainult nõrk fluorestsents "+": vaevu tuvastatav, kuid kindel fluorestsentsi signaal "++": ere fluorestsents on nähtav
