Kilede optilise ja elektronmikroskoopia proovide ettevalmistamise meetodid
Mikrofilmimise meetod hõlmab üldiselt nelja kategooriat: jaotusmeetod, üldine tihendusmeetod, katmismeetod ja pressimismeetod.
①Viilu meetod. Optilise mikroskoobi viilu paksus on 2–25 mikronit, üldine taimne ja loomne materjal, viil on umbes 10 mikroni paksune. Jaotusmeetod varieerub sõltuvalt erinevatest manustamisvahenditest. Tavaliselt kasutatakse parafiini lõikamise meetodit, puuvillaliimiga lõikamise meetodit, külmutatud lõikamise meetodit ja glükoolmetakrülaadi meetodit (nimetatakse GMA-meetodiks). Parafiini lõikamise meetod hõlmab fikseerimise, kinnistamise, lõikamise, värvimise, dehüdratsiooni ja sulgemise etappe. Võti on kinnistada biomaterjal parafiinvahasse ja kasutada parafiinvaha toena, et lõigata vahaplokki sukeldatud biomaterjal ideaalseteks õhukesteks viiludeks. Toimimisprotsess on järgmine: fikseerimine → pesemine veega → samm-sammult madala kontsentratsiooniga kuni kõrge alkoholisisaldusega veetustamine → ksüleeni läbipaistvus → vahasse kastmine → kinnistamine → sektsioon → lappimine → ksüleeni vaha eemaldamine → samm-sammult kõrge kontsentratsiooniga madala kontsentratsioonini alkoholiga töötlemine ja lõpuks üleminek veele → värvimine → samm-sammult madala kontsentratsiooniga alkoholi dehüdratsioonist kõrge kontsentratsioonini → ksüleeni läbipaistvus → tihendamine vaiguliimiga. Kõikide filmitegemise tehnikate põhietapid on samad.
② Integreeritud tihendusmeetod. Kasutatakse üksikute rakkude, pisikeste organismide või hajutatud elundite jaoks kogu monteeritud kile meetodil. See meetod nõuab ka erinevaid fikseerimise, värvimise, dehüdratsiooni, läbipaistvuse ja tihendamise etappe. Seda meetodit kasutatakse nööride ja putukate suuosade valmistamiseks.
Määrimise meetod. Valmistamismeetod, mille puhul kergesti dispergeeritav bioloogiline proov kaetakse objektiklaasile. Näiteks vereproov.
④Vajutusmeetod. Looduslikud, kergesti hajuvad kuded või kergesti hajuvad kuded pärast töötlemist, nagu loomade spermatotsüüdid, juureotsa rakud jne, pluss katteklaas ja seejärel kuded jõuga purustada, nii et rakud või rakusisesed struktuurid levivad kihiks. filmimismeetoditest. Pressimeetodit kasutatakse sageli kromosoomide vaatlemiseks, mis on tavaliselt värvitud magenta atsetaadi, samblikupunase ja karboolhappe punasega.
