Sissejuhatus multifotoonse laserskaneeriva mikroskoobi eelistesse ja puudustesse
Multifotoonse laserskaneeriva mikroskoopia eelised:
1. Punase valguse või infrapuna valguse poolt ergastatud valguse hajumine on väike ja väikeste osakeste hajumine on pöördvõrdeline lainepikkuse neljanda astmega.
2. Pildistamise osast saab koguda rohkem hajutatud footoneid ilma aukudeta.
3. Nõelauk ei suuda eristada fookusest väljas või fookusalast kiirgavaid hajutatud footoneid ning sügavates kihtides mitme fotoni pildistamise signaali-müra suhe on hea.
4. Ühe footoni ergastamiseks kasutatav ultraviolett- või nähtav valgus neeldub ja nõrgeneb proovis kergesti enne, kui kiir jõuab fookustasandini ning sügavaid kihte ei ole lihtne ergutada.
5. Bioloogilise mikroskoobiga vaatlemisel on esmatähtis mitte kahjustada organismi enda aktiivset seisundit ning säilitada veeringlus, ioonide kontsentratsioon, hapniku ja toitainete ringlus. Valgusvaatluse puhul peab nii soojus- kui footonienergia jääma kiirgushulga ja valgusenergia piiresse, mis ei kahjusta rakke.
6. Multifotonmikroskoopial on palju eeliseid. Nagu kolmemõõtmeline eraldusvõime, sügav läbitung, hajumise efektiivsus, taustvalgus, signaali-müra suhe, juhtimine jne, on kõigil omadustel, mida varasematel lasermikroskoopidel ei olnud või mida nad ei suutnud ületada.
Multifotoonse laserskaneeriva mikroskoopia puudused:
1. Ainult fluorestsentskuvamiseks.
2. Kui proov sisaldab kromofoore, mis neelavad ergastavat valgust, võib proov olla termiliselt kahjustatud.
3. Eraldusvõimet on veidi vähendatud. Kuigi seda saab parandada, kasutades samaaegselt konfokaalset ava, läheb signaal kaotsi.
4. Kallite ülikiirete laserite piiratuse tõttu on multifotoni skaneeriva mikroskoobi hind suhteliselt kõrge.
