Fluorestsentsmikroskoopia põhimõtted ja struktuuri iseärasused
Fluorestsentsmikroskoopia on punkti kõrge luminestsentsefektiivsuse kasutamine värvisüsteemi filtreerimise kaudu, et kiirata teatud lainepikkusega valgust (nagu ultraviolett 3650 valgusesse või violetne-sinine 4200) ergastusvalgusena, ergastusena. Proovis olev fluorestseeruv materjal kiirgab erinevaid fluorestsentsi värve ja seejärel suurendatakse seda vaatluseks läbi objektiivi ja okulaaride. Sel viisil on tugeva kontrastsuse taustal, isegi kui fluorestsents on väga nõrk, lihtne tuvastada, kõrge tundlikkus, mida kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsiooni ning keemilise koostise uurimiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur koosneb tavalisest optilisest mikroskoobist ja mõnedest tarvikutest (nagu fluorestsentsvalgusallikas, ergastusfiltrid, kahevärviline valguskiire eraldaja ja blokeerivad filtrid jne). Luminofoorvalgusallikas – üldiselt kasutatav ülikõrgsurve elavhõbelamp (50-200W), mis võib kiirata erineva lainepikkusega valgust, kuid igal fluorestseeruval materjalil on tugevaim ergastuse fluorestsentsi lainepikkus, mistõttu on vaja lisada ergastusfiltreid (üldiselt ultraviolett-, violet-, sinine ja roheline ergastusfilter), nii et katsekehade kiiritamisel läbib ainult teatud lainepikkusega ergastav valgus, samas kui muu valgus neeldub. Seega on vaja lisada ergastusfilter (tavaliselt ultraviolett-, violet-, sinine ja roheline ergastusfiltrid), et katsekeha läbiks ainult teatud lainepikkusega ergastav valgus, samas kui muu valgus neelduks. Kui iga ainet kiiritatakse ergastusvalgusega, kiirgab see väga lühikese aja jooksul nähtavat fluorestsentsi pikema lainepikkusega kui kiiritatud valgus. Fluorestsents on spetsiifilisusega, üldiselt nõrgem kui ergastusvalgus, selleks et oleks võimalik jälgida spetsiifilist fluorestsentsi, tuleb kasutada blokeerimise (või summutamise) lisamise vajaduse taga objektiivi.
Fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise mikroskoobi erinevus
1. Valgustusmeetod on tavaliselt langev, see tähendab, et valgusallikas projitseeritakse näidisele läbi objektiivi;
2. Valgusallikaks on ultraviolettvalgus, lühema lainepikkusega ja suurema lahutusvõimega kui tavalistel mikroskoopidel;
3. Spetsiaalseid filtreid on kaks, valgusallika ees olevat filtrit kasutatakse nähtava valguse väljastamiseks ning okulaari ja objektiiviläätse vahelist ultraviolettkiirgust, et kaitsta inimsilma.
Fluorestsentsmikroskoop on ka omamoodi optiline mikroskoop, peamine erinevus seisneb selles, et nende kahe ergastuse lainepikkus on erinev. See määrab fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi struktuuri ning erinevate meetodite kasutamise.
Fluorestsentsmikroskoop on immunofluorestsentstsütokeemia põhitööriist. See koosneb valgusallikast, filtriplaadisüsteemist ja optilisest süsteemist ning muudest peamistest komponentidest. See kasutab teatud valguse lainepikkust, et stimuleerida proovi kiirgama fluorestsentsi, mida suurendatakse läbi objektiivi ja okulaari süsteemi, et jälgida proovi fluorestsentskujutist.
