Laserskaneeriva multifotoni mikroskoopia eeliste suurendamine
Laser-skaneeriv multifotonmikroskoopia on optilise mikroskoopiaga võrreldes oluline edasiminek. See suudab jälgida elusrakkude, fikseeritud rakkude ja kudede süvastruktuuri ning saada selgeid ja teravaid mitmekihilisi Z-tasandi struktuure, st optilisi lõike, millest saab konstrueerida Proovi kolmemõõtmelise tahke struktuuri. Konfokaalne mikroskoopia kasutab laservalgusallikat, mis pärast laiendamist täidab kogu objektiiviläätse tagumise fookustasandi ja seejärel läbib objektiivi läätsesüsteemi, et koonduda väga väikesesse punkti proovi fookustasandil. Sõltuvalt objektiiviläätse numbrilisest avast on eredaima valgustuspunkti läbimõõt umbes 0,25 ~ 0,8 μm ja sügavus umbes 0,5 ~ 1,5 μm . Konfokaalse punkti suurus sõltub mikroskoobi konstruktsioonist, laseri lainepikkusest, objektiiviläätse omadustest, skaneerimisüksuse olekuseadetest ja proovi omadustest. Välimikroskoopil on suur valgustusvahemik ja sügavus, samas kui konfokaalsel mikroskoopial on fokuseeritud valgustus, mis on fokusseeritud fookustasandi fookuspunktile. Konfokaalse mikroskoopia kõige põhilisem eelis on see, et sellega saab teha paksude fluorestseeruvate proovide peent optilist lõikamist (mis võib ulatuda 50 μm või rohkem) ja lõikude paksus on umbes 0,5–1,5 μm. Mikroskoobi Z-telje samm-mootori abil proovi üles-alla liigutamisega saab saada mitmeid optilise lõigu pilte. Kujutise teabe hankimist juhitakse tasapinnas ja seda ei sega proovi teistest kohtadest väljastatud signaalid. Pärast tausta fluorestsentsi mõju eemaldamist ja signaali-müra suhte suurendamist on konfokaalsete kujutiste kontrastsus ja eraldusvõime oluliselt paranenud võrreldes traditsiooniliste väljavalgustusega fluorestsentspiltidega. Paljudes proovides on paljud keerulised konstruktsioonikomponendid omavahel põimunud, et moodustada keerukaid süsteeme, kuid kui on kogutud piisavalt optilisi sektsioone, saame need tarkvara abil kolmemõõtmeliselt rekonstrueerida. Seda eksperimentaalset meetodit on bioloogilistes uuringutes laialdaselt kasutatud rakkude või kudede vaheliste keerukate struktuursete ja funktsionaalsete suhete selgitamiseks.
