Mikroobide populatsiooni määramine - otsemikroskoopiline loendusmeetod!
I. Eesmärgi nõuded
1, hematokriti plaatide loendamise põhimõtte selgitamiseks.
2, omandage hematokriti plaadi abil mikroobide loendamise meetod.
II. Põhiprintsiibid
Mikroskoobi otseloendamise meetod on väike kogus proovi suspensiooni, mida testitakse spetsiaalsel kindla pindala ja mahuga objektiklaasil (tuntud ka kui bakterioloogiline loendur), mis loeb mikroskoobis otse lihtsa, kiire ja intuitiivse meetodi abil. Praegu on kodu- ja välismaised laialt kasutatavad bakterioloogilised loendurid: vererakkude loendusplaat, Peteroff-Hauseri bakterioloogilised loendurid ja Hawksley bakterioloogilised loendurid jne, mida saab kasutada pärmi, bakterite, hallitusseente eoste ja muude loendussuspensioonide jaoks, põhiprintsiip. on sama. Viimase kahe loendurite tüübi kogumaht on pärast katteklaasi peale panemist 0.02 mm3 ning vahemaa katteklaasi ja kanduri viilu vahel on vaid 0,02 mm, nii et väiksemad lahtrid, nagu nt. Baktereid saab jälgida ja loendada õliimmersioonobjektiiviga. Lisaks nende loendurite kasutamisele on olemas ka otse mikroskoobi all vaadeldava määrdumisala ja vaatevälja pindala suhte hindamismeetod, mida üldiselt kasutatakse lehmapiima bakterioloogiliseks uuringuks. Otsese mikroskoobi loendusmeetodi eelised on intuitiivsed, kiired ja hõlpsasti kasutatavad. Selle meetodi puuduseks on aga see, et tulemuseks on tavaliselt surnud ja elusorganismide summa. Selle puuduse ületamiseks on mõned meetodid, näiteks elusate bakteritega värvitud mikrokambrikultuuri kombineerimine (lühiajaline) ja tsütokineesi inhibiitorite lisamine, et saavutada ainult elusorganismide loendamise eesmärk.
Toimingu sammud
1, Bakterisuspensiooni valmistamine
Kasutage sobiva kontsentratsiooniga õllepärmi bakterisuspensiooni valmistamiseks steriilset soolalahust.
2, peegli loenduskamber
Enne proovide lisamist tuleks kõigepealt kontrollida loendusplaadi loenduskambrit. Kui seal on mustust, tuleb see enne loendamist puhastada ja kuivatada.
3, proovide lisamine
Puhastage ja kuivatage vererakkude loendusplaat, mis on kaetud katteklaasiga ning seejärel raputage steriilse kapillaarbüreti abil õllepärmi suspensiooni katteklaasi servast, et tilgutaks väike tilk, nii et bakterivedelik pääseb kapillaaride kaudu kapillaaride sissetungimise teel. loenduskamber automaatselt, üldiselt saab loenduskambri täita bakteriaalse vedelikuga. Proovide võtmisel tuleb bakterilahust enne korralikult loksutada; proovide lisamisel ei tohiks loenduskambris olla õhumulle.
4, mikroskoobi loendamine
Pärast proovi lisamist laske sellel 5 minutit puhata, seejärel asetage vererakkude loendusplaat mikroskoobi kandurile, leidke esmalt madala suurendusega loenduskambri asukoht ja seejärel lülitage see loendamiseks suurele suurendusele. Reguleerige mikroskoobi valguse intensiivsust sobivalt, kuna peegelvalgusega mikroskoop peaks pöörama tähelepanu ka sellele, et valgus ei oleks ühele poole kallutatud, vastasel juhul pole vaatevälja lihtne loenduskambri ruudustiku joont selgeks muuta või näha ainult vertikaalset või ainult horisontaalset joont. Kui enne loendamist leitakse, et bakteriaalne vedelik on liiga paks või liiga õhuke, tuleb lahjendus enne loendamist uuesti reguleerida. Asjakohane on proovi lahjendamise üldnõue umbes 5–10 bakteri kohta igas rakus. Iga loenduskambri jaoks valitakse loendamiseks organismid 5 keskmises kambris (4 nurka ja üks keskmine kamber keskel). Ruudustiku joontel paiknevaid organisme loetakse tavaliselt ainult ülemisel ja paremal real. Pärmseene tärkamise korral, kui tärkav keha jõuab poole emaraku suurusest, loetakse see kaheks organismiks. Proovi loendamine kahest loenduskambrist keskmise väärtusega, et arvutada proovi bakterite sisaldus.
5. Hematokriti plaadi puhastamine
Pärast kasutamist loputage vererakkude loendusplaati veega kraani all, ärge kasutage pesemiseks ja harjamiseks kõvasid esemeid, kuivatage seda ise ega kasutage pärast pesemist kuivatamiseks fööni. Kontrollige plaati mikroskoopiliselt, et näha, kas igas kambris on organismide jääke või muid sadet. Kui see pole puhas, tuleb pesemist korrata, kuni see on puhas.
