Bioloogiliste proovide ettevalmistamine ja vaatlemine elektronmikroskoopide abil
Mikroskoobi eraldusvõime sõltub kasutatava valguse lainepikkusest. 1933. aastal ilmunud elektronmikroskoop kasutab valgusallikana nähtavast valgusest palju lühema lainepikkusega elektronkiire. See parandab oluliselt selle eraldusvõimet võrreldes optiliste mikroskoopidega. Valgusallikate erinevused toovad kaasa ka mitmeid erinevusi elektronmikroskoopide ja optiliste mikroskoopide vahel.
Tuginedes elektronkiire kujutise põhimõtete erinevustele ja kiirte ja proovidega suhtlemise viisidele, on tänapäevased elektronmikroskoobid arenenud mitut tüüpi. Kõige sagedamini kasutatavad on transmissioonelektronmikroskoobid (TEM) ja skaneerivad elektronmikroskoobid (SEM). TEM-i kogusuurendus võib ulatuda 1000–1 000 000 korda, SEM-i suurendus aga 20–300 000 korda. See katse tutvustab peamiselt proovide ettevalmistamist transmissioonielektronmikroskoopide ja skaneerivate elektronmikroskoopide jaoks.
II. Seadmed ja materjalid
Tüvi:Escherichia colikaldus kultuur
Lahused ja reaktiivid: Formvar, kontsentreeritud väävelhape, absoluutne etanool, steriilne vesi, 2% naatriumfosfovolframaadi vesilahus (pH 6,5–8,0), 0,3% polüvinüülformaallahus (lahustunud kloroformis), tsütokroom C, ammooniumatsetaat, pBR3222 plasmiid.
Instrumendid ja tarvikud: tavaline optiline mikroskoop, vasest võred, Buchneri lehter, keeduklaas, Petri tass, steriilne tilguti, steriilsed tangid, tükeldamisnõel, klaasklaas, hemotsütomeeter, vaakumaurusti, kriitilise punkti kuivati jne.
III. Tööprotseduurid
(1) Proovi ettevalmistamine ja vaatlemine ülekandeelektronmikroskoopia jaoks
Metallvõrede töötlemine Optilise mikroskoopia proove vaadeldakse alusklaasidel. Transmissioonelektronmikroskoopia puhul ei saa elektronid aga läbi klaasi tungida, seetõttu kasutatakse selle asemel võrksubstraate, mida tavaliselt tuntakse proovivõredena. Proovivõred on saadaval erinevate spetsifikatsioonidega vastavalt materjalile ja kujule. Kõige laialdasemalt kasutatakse 200–400 võrgusilmaga vasest võreid. Vase võre tuleb enne kasutamist puhastada, et eemaldada saasteained, vastasel juhul kahjustatakse kandekilede kvaliteeti ja proovide mikropiltide selgust. Selles katses kasutatakse 400-meššseid vaskvõresid, mida töödeldakse järgmiselt: esmalt leotage mitu tundi Formvari lahuses, loputage korduvalt destilleeritud veega, seejärel dehüdreerige, leotades seda absoluutses etanoolis. Kui restid jäävad pärast ülaltoodud toiminguid määrdunud, leotage neid 1–2 minutit lahjendatud kontsentreeritud väävelhappes (1:1) või keetke mitu minutit 1% NaOH lahuses. Loputage hoolikalt destilleeritud veega, dehüdreerige absoluutses etanoolis ja pange hilisemaks kasutamiseks kõrvale.
