Konfokaalse fluorestsentsmikroskoopia põhistruktuur
(1) Skannimismoodul
Skaneerimismoodul koosneb peamiselt nööpaugu valgusribast (kontrollib optiliste lõikude paksust), spektroskoopist (muutub valguse levimise suunda vastavalt lainepikkusele), emissioonifluorestsentskolorimeetrist (valib tuvastamiseks valguse teatud lainepikkuse vahemikus) ja detektor (fotokordisti toru). Fluorestsentsproovis sisalduv segafluorestsents siseneb skannerisse ja pärast tuvastusava valgusriba, spektromeetri ja kolorimeetriga valimist jagatakse see erinevateks monokromaatiliseks fluorestsentsideks, mis tuvastatakse erinevates fluorestsentskanalites ja moodustavad vastavad konfokaalsed kujutised. Samal ajal saab arvutiekraanile kuvada mitu paralleelset monokromaatilist fluorestsentspilti ja nende liitkujutisi.
(2) Fluorestsentsmikroskoopia süsteem
Mikroskoop on LSCM-i põhikomponent, mis on seotud süsteemi pildikvaliteediga. Mikroskoobi optilist rada saab hõlpsasti sisestada lõputult kaugel asuvasse optilisse süsteemi koos optiliste võimalustega, ilma et see mõjutaks pildikvaliteeti ja mõõtmise täpsust. Objektiiv peaks olema suure numbrilise avaga lamevälja apokromaatiline objektiiv, mis on kasulik fluorestsentsi omandamiseks ja selgeks pildistamiseks. Objektiivi läätsede rühma teisendamist, värvifiltrirühma valikut, lava liikumise reguleerimist ja fookustasandi mälu lukustamist peaks arvuti automaatselt juhtima.
Laserskaneerivas konfokaalses mikroskoobis kasutatav fluorestsentsmikroskoop on üldiselt sama, mis tavaline fluorestsentsmikroskoop, kuid sellel on oma omadused: see tuleb ühendada skanneriga, et laser saaks siseneda mikroskoobi objektiivi proovi kiiritamiseks ja proovi kiirgav fluorestsents jõuab detektorini; Vajalik on valgustee konversiooniseade, mis muudab elavhõbedalambid laseriteks ja elavhõbedalambi valgustugevust saab reguleerida.
(3) Tavalised laserid
Laserskaneerivas konfokaalses mikroskoopias kasutatavad laseriallikad hõlmavad ühe laseri ja mitme laseri süsteeme ning tavaliselt kasutatavad laserid hõlmavad järgmist kolme tüüpi:
Pooljuhtlaser: 405 nm (ultravioletse spektrijoone lähedal)
Argooni ioonlaser: 457 nm, 477 nm, 488 nm, 514 nm (sinine roheline tuli)
He-Ne laser: 543 nm (roheline tuli He-Ne roheline laser) 633 nm (punane valgus He-Ne punane laser)
UV-laser (UV-laser): 351 nm, 364 nm (UV-valgus)
(4) Abiseadmed
Õhkjahutusega, vesijahutusega jahutussüsteemid ja reguleeritud toiteallikad.
Laserskaneeriva konfokaalse mikroskoobi põhitööpõhimõte seisneb esmalt laserist teatud lainepikkusega ergastusvalguse kiirgamises. Pärast võimendamist läbib valgus skanneris valgustatud nööpnõela valgusriba, moodustades punktvalgusallika. Objektiivi lääts keskendub proovi fookustasandile ja proovi vastavad valgustatud punktid ergastuvad ja kiirgavad fluorestsentsi. Pärast tuvastusava valgusriba läbimist jõuab see detektorini ja kuvatakse arvuti jälgimisekraanile. Sel viisil moodustub täielik konfokaalne kujutis fookustasandil oleva proovi iga punkti fluorestsentskujutistest, mida nimetatakse valgusviiluks.
