Multifotoonse laserskaneeriva mikroskoopia eelised ja puudused
Multifotoonne laserskaneeriv mikroskoopia on laserskaneeriva mikroskoopia tehnoloogial põhinev eksperimentaalne meetod, mis annab kolmemõõtmelisel vaatlusel täpsemaid optilisi lõikevõimalusi. Mitmefotoni fluorestsentsi ergastusmeetodil kasutatakse proovide kõrge eraldusvõimega fluorestsentskujutiste kogumiseks pika lainepikkusega punast valgust või infrapuna-lähedast valgust, mis kahjustab elavaid proove minimaalselt, seega sobib see elusrakkude pildistamiseks, eriti paksude eluskudede jaoks, nagu näiteks ajulõigud, embrüod, Tervete elundite või isegi tervete organismide pildiuuringud.
Eelised on järgmised:
1. Punase valguse või infrapuna valguse poolt ergastatud valguse hajumine on väike (väikeste osakeste hajumine on pöördvõrdeline lainepikkuse neljanda astmega).
2. Puudub vajadus nööpnõelte järele ja pildistamise sektsioonist saab koguda rohkem hajutatud footoneid.
3. Nõelauk ei suuda eristada fookusest väljas või fookusalast kiirgavaid hajutatud footoneid ning sügavates kihtides mitme fotoni pildistamise signaali-müra suhe on hea.
4. Ühe footoni ergastamiseks kasutatav ultraviolett- või nähtav valgus neeldub ja nõrgeneb proovis kergesti enne, kui kiir jõuab fookustasandini ning sügavaid kihte ei ole lihtne ergutada.
5. Bioloogilise mikroskoobiga vaatlemisel on esmatähtis mitte kahjustada organismi enda aktiivset seisundit ning säilitada veeringlus, ioonide kontsentratsioon, hapniku ja toitainete ringlus. Valgusvaatluse puhul peab nii soojus- kui footonienergia jääma kiirgushulga ja valgusenergia piiresse, mis ei kahjusta rakke.
6. Mitmefotonmikroskoopial on ka palju eeliseid. Nagu kolmemõõtmeline eraldusvõime, sügav läbitung, hajumise efektiivsus, taustvalgus, signaali-müra suhe, juhtimine jne, on lasermikroskoobidel suurepäraseid omadusi, mida ei ole või mis on varem võrreldamatud.
Multifotoonset konfokaalset laserskaneerivat mikroskoopiat on laiendatud erinevatesse uurimis- ja rakendusvaldkondadesse. See võib teostada proovide kolmemõõtmelist mittepurustavat jälgimist loomulikus olekus ning parandada süsteemi eraldusvõimet ja signaali-müra suhet. Mitmefotoni ergastavate materjalide kasutamine See võib realiseerida ka kolmemõõtmelise kõrgusandmete salvestamise ja kolmemõõtmelise suvalise suuna mikrotootmise, millel on kõrge rakendusväärtus. Usutakse, et mitmefotoonse konfokaalse mikroskoopiaga seotud masinate, materjalide ja lasertehnoloogia edasiarendamisel on rohkem fotoni konfokaalset laserskaneerivat mikroskoopi, mis saavad suurema arengu ja laiema rakenduse.
Puudused on järgmised:
1. Ainult fluorestsentskuvamiseks.
2. Kui proov sisaldab kromofoore, mis võivad neelata ergastavat valgust, näiteks pigmente, võib proov olla termiliselt kahjustatud.
3. Eraldusvõimet on veidi vähendatud. Kuigi seda saab parandada, kasutades samaaegselt konfokaalset ava, läheb signaal kaotsi.
4. Kallite ülikiirete laserite piiratuse tõttu on multifotoni skaneeriva mikroskoobi hind suhteliselt kõrge.
