Fluorestsentsmikroskoobi põhimõte ja struktuursed omadused
Fluorestsentsmikroskoop kasutab kõrge valgustõhususega punkti, et kiirata teatud lainepikkusega valgust (nt ultraviolettvalgus 3650 või violetne-sinine valgus 4200) läbi värvifiltrisüsteemi ergastusvalgusena ja seejärel ergastab proovis olevad fluorestseeruvad ained, et need kiirgaksid. fluorestsentsi erinevate värvidega ja seejärel jälgib neid objektiiviläätse ja okulaari võimenduse kaudu. Sel viisil on tugeva kontrastfooni all isegi väga nõrga fluorestsentsi korral seda lihtne tuvastada ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsioonide ning keemilise koostise uurimiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur koosneb tavalisest optilisest mikroskoobist ja mõnedest tarvikutest (nagu fluorestsentsvalgusallikas, ergastusfilter, dikroonse kiire jaotur ja blokeeriv filter jne). Luminofoorvalgusallikas —— Üldiselt kasutatakse ülikõrgsurve elavhõbelampi (50-200W), mis võib kiirata erineva lainepikkusega valgust, kuid igal fluorestseeruval ainel on ergastusvalguse lainepikkus, mis tekitab kõige tugevama fluorestsentsi, seega vaja lisada ergastusfiltreid (üldiselt ultraviolett-, lilla-, sinise- ja rohelised ergastusfiltrid), nii et katsekehale edastatakse ainult teatud lainepikkusega ergastusvalgust ja kogu muu valgus neeldub. Pärast iga aine kiiritamist ergastusvalgusega kiirgab see väga lühikese aja jooksul nähtavat fluorestsentsi, mis on pikem kui kiirguse lainepikkus. Fluorestsentsil on spetsiifilisus, mis on üldiselt nõrgem kui ergastusvalgus. Spetsiifilise fluorestsentsi jälgimiseks on vaja objektiivi taga blokeerida (või alla suruda) ja seda tuleb kasutada koos.
Erinevus fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise mikroskoobi vahel
1. Valgustusrežiim on tavaliselt episoodiline, see tähendab, et valgusallikas projitseeritakse näidisele läbi objektiivi;
2. Valgusallikaks on lühikese lainepikkusega ja tavalisest mikroskoobist kõrgema eraldusvõimega ultraviolettvalgus;
3. Spetsiaalseid filtreid on kaks, valgusallika ees olevat filtrit kasutatakse nähtava valguse väljastamiseks ning okulaari ja objektiivi vahelist ultraviolettkiirgust, et kaitsta inimeste silmi.
Fluorestsentsmikroskoop on ka omamoodi optiline mikroskoop, peamine erinevus seisneb selles, et nende ergastuslainepikkused on erinevad. See määrab fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi erinevuse struktuuris ja kasutuses.
Fluorestsentsmikroskoop on immunofluorestsentstsütokeemia põhitööriist. See koosneb valgusallikast, filtriplaadisüsteemist ja optilisest süsteemist. See kasutab teatud lainepikkusega valgust proovi ergutamiseks fluorestsentsi kiirgamiseks ja suurendab seda läbi objektiivi ja okulaari süsteemi, et jälgida proovi fluorestsentskujutist.
