Teadmised konfokaalse fluorestsentsmikroskoopia kohta
Konfokaalse fluorestsentsmikroskoopia põhiprintsiip: proovi kiiritamiseks kasutatakse punktvalgusallikat ning fookustasandile moodustub täpselt piiritletud väike valguslaik. koosneb jaoturitest. Kiirjaotur saadab fluorestsentsi otse detektorisse. Valgusallika ja detektori ees on nõelaauk, mida nimetatakse vastavalt valgustusnõelaauguks ja tuvastusnõelaauguks. Nende kahe geomeetriline suurus on sama, umbes 100-200nm; fookustasandi valgustäpi suhtes on need kaks konjugeeritud, see tähendab, et valguspunkt läbib läätsede seeriat ja lõpuks saab seda korraga fokuseerida valgustusnõelaaugule ja tuvastusnõelaaugule. Sel viisil saab fookustasandi valgust tuvastusava ulatuses koonduda, samal ajal kui fookustasandist ülevalt või altpoolt tulev hajutatud valgus blokeeritakse väljaspool tuvastusava ja seda ei saa pildistada. Laser skaneerib proovi punkt-punktilt ning fotokordisti toru saab pärast nööpaugu tuvastamist ka punkt-punktilt vastava valguspunkti konfokaalse pildi, mis muundatakse digitaalseks signaaliks ja edastatakse arvutisse ning lõpuks koondatakse selgeks. kogu fookustasandi konfokaalne kujutis ekraanil .
Iga fokaaltasandi kujutis on tegelikult proovikeha optiline ristlõige ja sellel optilisel ristlõikel on alati teatud paksus, mida tuntakse ka optilise õhukese lõiguna. Kuna valguse intensiivsus fookuspunktis on palju suurem kui mittefookuspunktis ja mittefokaaltasandiline valgus filtreeritakse nööpnõela abil, on konfokaalse süsteemi teravussügavus ligikaudu null ja skaneerimine piki Z. -telg suudab teostada optilist tomograafiat, moodustades vaadeldava kahemõõtmelise optilise lõigu proovi fookuspunktis. Kombineerides XY tasapinna (fokaaltasandi) skaneerimise Z-telje (optilise telje) skaneerimisega, saab proovi kolmemõõtmelise kujutise saada pidevate kihtide kahemõõtmeliste kujutiste kogumisel ja töödelda spetsiaalse arvutitarkvaraga.
