Miks on õliläätse suurendus suurem kui tavalisel objektiivil?
Põhjused, miks bakterid tuleb enne värvimist mikrobioloogilistes katsetes fikseerida:
1: tapab rakud, seda on lihtne värviga värvida.
2: Pange bakterid slaidile kinni ja neid pole lihtne veega maha pesta.
Kinnitamisel tuleb seda aeglaselt kuivatada. Kui soovite tõesti kiirendada, võite seda paar korda kuivatada piirituslambi leegi kohal. Ärge laske klaasil libisemisel kuumeneda, muidu võib see hävitada bakterite eluvormi.
Grami värvimine ja bakterite mikroskoopiline jälgimine
1. Katsepõhimõte
Grami värvimise põhimõte: bakterid reageerivad Grami värvimisele erinevalt oma rakuseinte koostise ja struktuuri tõttu. Grampositiivsete bakterite rakusein on peamiselt peptidoglükaani moodustatud võrgusõlm. Etanooliga töötlemisel muutub dehüdratsiooni tõttu võrgustruktuuri pooride suurus väiksemaks ja läbilaskvus väheneb, mistõttu kristallviolet-joodi kompleks Aine ei ole kergesti elueeritav ja rakus kinni jääv ning sinine- esmase värvimisaine lilla värvus säilib ka pärast värvieemaldust ja vastuvärvimist. Gramnegatiivsete bakterite rakuseina peptidoglükaanikiht on õhuke ja lipiidide sisaldus kõrge, nii et värvitustamise ajal lahustub lipiid etanoolis (või atsetoonis) ja rakuseina läbilaskvus suureneb, nii et et kristallvioleti-joodi kompleks Seda on kergem elueerida ja pärast kontravärviga värvimist värvitakse rakud vastuvärvi punase värviga. Mikroskoobi pildistamise põhimõte: Kaasaegsed tavalised optilised mikroskoobid kasutavad kujutise suurendamiseks kahte läätsesüsteemi – okulaari ja objektiivi, seetõttu nimetatakse neid sageli liitmikroskoopideks. Mikroskoobi optilises süsteemis on objektiiviläätse jõudlus kõige kriitilisem ja õliläätse suurendus suurim, mis on mikrobioloogiliste uuringute jaoks kõige olulisem. Slaidiklaasi ja läätse vahele immersioonõli lisamise peamine eesmärk on suurendada valgustuse heledust ja suurendada mikroskoobi eraldusvõimet. Õli kasutatakse valguse läbilaskevahendina õhu asemel, et vähendada valguse murdumist või täielikku peegeldust ja muuta vaadeldav pilt selgemaks.
2. Katseseadmed
1. Kolooniad:
Escherichia coli 24h toitaineagari kaldkultuur,
Staphylococcus aureus umbes 24h toitaineagari kaldkultuur, Bacillus subtilis 12-18h toitaineagari kaldkultuur.
2. Lahused või reaktiivid:
Destilleeritud vesi, joodilahus, kristallvioletne värvimislahus, 95% alkohol, safraniini värvimislahus, seedriõli. 3. Instrument:
Mikroskoop, klaasklaas, inokulatsioonisilmus, piirituslamp, pintsetid, läätsekude.
3. Eksperimentaalsed sammud
a:
1. Määri
Võtke alusklaas välja, süütage alusklaas, põletage slaidil olev alkohol läbi ja steriliseerige, tilgutage keskele väike tilk destilleeritud vett, kasutage inokulatsioonisilmust, et katse kaldsöötmelt õrnalt korjata väike kogus baktereid. katseklaasi kogu protsessi ajal peaks katseklaasi suu olema alkoholilambi kohal ja söötme saastumise vältimiseks peaks kiirus olema kiire. Seejärel määrige ringjate liigutustega väikesed veepiisad klaasslaidile, peatuge, kui veepiisad on hägused, ja oodake, kuni need kuivavad ja kinnituvad.
2. Esmane värvimine
Tilgutage kolooniale kristallvioletti (sobib lihtsalt katta bakterite kile), värvige 1-2 minutit, valage värvimislahus maha ja loputage slaidi pealt peene veega, kuni eluaat on värvitu, ja asetage plekk slaidile. Raputa viiludelt vesi maha.
3. Mordant
Jääkvee eemaldamiseks lisage tilkhaaval joodilahust, katke umbes 1 min ja peske veega.
4. Värvusetustamine
Raputage alusklaasilt vesi maha, kallutage alusklaasi ja lisage valge tausta all värvi eemaldamiseks 95 protsenti alkoholi, kuni väljavoolav alkohol lihtsalt ei tundu sinine, loputage alkohol kohe veega ja asetage klaasklaas. viiludel vesi ära.
5. Vastuvärvimine
Värvige umbes 1-2 minutit safraniini lahusega, peske veega ja kuivatage seejärel imava paberiga
6. Mikroskoopiline uuring:
Otsige madala suurendusega läätse all vaadeldavat bakterikolooniat (liigutage slaidi, kui tunnete punast varju, lõpetage kohe, reguleerige suurendust, kui see pole koloonia, jätkake otsimist), tõstke objektiivi silinder, ja seejärel lülitage õlipeeglile. Lisage proovialale tilk seedriõli ja laske läätse silinder ettevaatlikult jämeregulaatoriga alla nii, et õlilääts oleks õli sisse sukeldatud ja prooviks peaaegu puudutatud. Tõstke kondensaator kõrgeimasse asendisse ja avage ava täielikult, kasutage jämeregulaatorit, et tõsta objektiivi korpust aeglaselt, kuni objekti kujutis ilmub vaatevälja, ja kasutage peenregulaatorit, et muuta see selgeks ja teravaks.
