Mis vahe on fluorestsentsmikroskoobil ja pöördmikroskoobil?
Mikroskoop on oluline vahend rakukultuuris ja sellega seotud tuletiskatsetes. Praegu on turul erinevat tüüpi mikroskoope. Oma vajadustele vastava ja sobiva mikroskoobi valimine on väljakutse. Järgnevalt tutvustame pöördmikroskoopide ja fluorestsentsmikroskoopide põhimõtteid, et saaksite hõlpsalt valida.
Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel mikroskoobil ja koosneb peamiselt kolmest osast: mehaaniline osa, valgustusosa ja optiline osa.
Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel püstmikroskoobil, ainult et objektiivilääts ja valgustussüsteem on vastupidised, esimene on lava all ja teine lava kohal.
See struktuur võimaldab oluliselt suurendada valgustuse kontsentreerimissüsteemi ja lava vahelist efektiivset kaugust, mis on mugav paksemate vaadeldavate objektide, näiteks Petri tasside ja rakukultuuri kolvide paigutamiseks (muidugi on lubatud ka klaasklaasid). Nendevaheline töökaugus ei pea olema väga suur.
Pöördmikroskoopi kasutatakse mikroorganismide, rakkude, bakterite, koekultuuride, suspensioonide, setete jms vaatlemiseks meditsiini- ja tervishoiuüksustes, kolledžites ja ülikoolides ning uurimisinstituutides. See suudab pidevalt jälgida rakkude ja bakterite paljunemis- ja jagunemisprotsessi söötmes ning pildistada seda protsessi mis tahes vormis.
Seda kasutatakse laialdaselt tsütoloogias, parasitoloogias, onkoloogias, immunoloogias, geenitehnoloogias, tööstuslikus mikrobioloogias, botaanikas ja muudes valdkondades.
Fluorestsentsmikroskoopiat kasutatakse keemiliste ainete imendumise, transpordi, jaotumise ja lokaliseerimise uurimiseks rakkudes.
Kontrollitava objekti jaoks on fluorestsentsi tekitamiseks kaks võimalust: autofluorestsents, mis kiirgab fluorestsentsi vahetult pärast ultraviolettkiirgust; sekundaarne fluorestsents, mis võib kiirata fluorestsentsi pärast seda, kui vaadeldavat objekti töödeldakse fluorestsentsvärvidega ja seejärel kiiritatakse ultraviolettvalgusega.
Mõned rakkudes olevad ained, näiteks klorofüll, tekitavad pärast ultraviolettkiirtega kiiritamist autofluorestsentsi; mõned ained ei saa iseenesest fluorestseeruda, kuid kui need on värvitud fluorestseeruvate värvainete või fluorestseeruvate antikehadega, võivad nad pärast ultraviolettkiirtega kiiritamist eraldada ka sekundaarset fluorestsentsi.
Fluorestsentsmikroskoop kasutab kõrge valgustõhususega punktvalgusallikat ja kiirgab ergutusvalgusena läbi värvifiltrisüsteemi teatud lainepikkusega valgust (ultraviolettvalgus 365 nm või violetne sinine valgus 420 nm) pärast proovis olevate fluorestseeruvate ainete ergastamist. erinevaid fluorestsentsi värve ja seejärel jälgige objektiivi ja okulaare suurendusega.
Tugeva kontrastse tausta all, isegi kui fluorestsents on väga nõrk, on seda lihtne tuvastada ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsioonide ning keemilise koostise uurimiseks.
