Millised on konfokaalse lasermikroskoopia eelised
Võrreldes traditsiooniliste laivälja mikroskoopidega on laserskaneerival konfokaalsel mikroskoopial kõrglahutusega, kõrge eraldusvõime ja kõrge tundlikkus. Seda kasutatakse laialdaselt biomeditsiini valdkonnas ja sellest on saanud selles valdkonnas oluline pilditöötlusvahend. Miks võib confocal saada nii palju armastust ja millised eelised sellel on? Selles artiklis on loetletud kolm aspekti, et arutada konfokaali eeliseid.
Koguge signaali ainult fookustasandil, muutes pildi häguseks
Kuidas siis konfokaalne mikroskoopia selle eelise saavutab? Selle põhjuseks on põhiline konfokaalne riistvara – nööpnõel, nagu on näidatud joonisel 2. See on väike auk detektori ees ja asetatakse proovi fokaaltasandiga konjugeeritud optilisele tasapinnale. Kui ergastusvalgus kiiritab proovi, ergastatakse nii prooviala fookustasandit kui ka mittefokaaltasandit, et genereerida fluorestsentssignaale, reguleerida sobivat nööpnõela suurust (tavaliselt 1 Au), et fluorestsentssignaal oleks fookustasandil. (roheline punktiirjoon) võivad olla fluorestseeruvad signaalid (punased ja sinised katkendlikud jooned), mis läbivad nööpaugu, et jõuda detektorini fookustasandist välja, ei pääse detektorini läbi tihvtiaugu. Riistvaraliste aukude lisamise kaudu saab konfokaalne seade saada selgeid ja kvaliteetseid pilte, muutmata tavaliste fluorestsentsmikroskoobide valmistamise meetodit.
Tänu nööpnõela olemasolule saame signaali hankida ainult fookustasandil ja saada kõrge eraldusvõimega kahemõõtmelise pildi. Pidevalt Z-telje asendit reguleerides on võimalik saada kahemõõtmelisi pilte erinevates Z-telje positsioonides ja saada pidevat "optilise viilu" kujutiste seeriat. Pärast nende optiliste lõikude saamist saab instrumendi tarkvaraga varustatud 3D-moodulit kasutada 3D-kujutise rekonstrueerimiseks, et luua selge 3D-kujutis. See mittepurustav, pidev optiliste lõikude kujutiste kogum realiseerib "raku CT" funktsiooni.
Kolokalisatsiooni tulemuste täpsus on tihedalt seotud pildi eraldusvõimega, seega peame kolokalisatsioonikatsete läbiviimisel valima kõrgema eraldusvõimega pildistamismeetodi. Võrreldes traditsiooniliste mikroskoopidega on konfokaalne mikroskoopia oma kõrge eraldusvõimega eeliste tõttu muutunud võimsaks kolokalisatsiooniuuringute vahendiks.
Difraktsioonipiiri olemasolu tõttu on tavaline konfokaalne optiline eraldusvõime umbes 200 nm. Kui peame jälgima struktuure, mis on suuremad kui 200 nm, saab konfokaalne täpselt määrata kolokalisatsiooni astme. Kui on vaja kolokalisatsioonianalüüsi, saab valida konfokaalses tarkvaras varustatud kolokalisatsioonianalüüsi mooduli.
