Fluorestsentsmikroskoobi põhialused ja struktuurielemendid
Fluorestsentsmikroskoopia kasutab suure valgusefektiivsusega punkti, et kiirata läbi filtrisüsteemi teatud lainepikkusega valgust (näiteks ultraviolettvalgust 3650 tolli või lillatsinist valgust 4200 tolli) ergastava valgusena, et ergutada proovis olevaid fluorestseeruvaid aineid, et kiirata fluorestsentsi. erinevad värvid Pärast seda jälgige objektiivi ja okulaari suurendusega. Sel viisil on tugeva kontrastsusega tausta all, isegi kui fluorestsents on väga nõrk, lihtne tuvastada ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsioonide ning keemilise koostise uurimiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur koosneb tavalisest optilisest mikroskoobist ja mõnedest tarvikutest (nagu fluorestsentsvalgusallikas, ergastusfilter, kahevärviline kiire jaotur ja blokeeriv filter jne). Luminofoorvalgusallikas – kasutatakse tavaliselt ülikõrgsurve elavhõbedalampi (50-200W), mis võib kiirata erineva lainepikkusega valgust, kuid igal fluorestseeruval ainel on ergastuslainepikkus, mis tekitab kõige tugevama fluorestsentsi, seega ergastusfilter ( Üldiselt on olemas ultraviolett-, lilla-, sinine ja roheline ergastusfiltrid), mis lasevad läbi ainult teatud lainepikkusega ergastusvalguse ja kiiritavad proovi, neelates samal ajal muud valgust. Pärast iga aine kiiritamist ergastusvalgusega kiirgab see väga lühikese aja jooksul nähtavat fluorestsentsi, mille lainepikkus on pikem kui kiirguse lainepikkus. Fluorestsents on spetsiifiline ja üldiselt nõrgem kui ergastusvalgus. Spetsiifilise fluorestsentsi jälgimiseks tuleb objektiivi taha lisada blokeering (või summutus) ja seda kasutada koos sellega.
Erinevus fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise mikroskoobi vahel
1. Valgustusmeetod on tavaliselt episkoopiline, st valgusallikas projitseeritakse näidisele läbi objektiivi;
2. Valgusallikaks on ultraviolettvalgus, lainepikkus on lühem ja eraldusvõime kõrgem kui tavalistel mikroskoopidel;
3. Spetsiaalseid filtreid on kaks, valgusallika ees olevat filtrit kasutatakse nähtava valguse väljastamiseks ning okulaari ja objektiiviläätse vahelist ultraviolettkiirte filtreerimiseks, et kaitsta inimsilma.
Fluorestsentsmikroskoop on ka omamoodi optiline mikroskoop, peamine erinevus seisneb selles, et nende kahe ergastuslainepikkus on erinev. See määrab fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi erinevuse struktuuri ja kasutuse osas.
Fluorestsentsmikroskoopia on immunofluorestsentstsütokeemia oluline tööriist. See koosneb põhikomponentidest, nagu valgusallikas, filtriplaadi süsteem ja optiline süsteem. See on teatud valguse lainepikkuse kasutamine proovi ergutamiseks fluorestsentsi kiirgamiseks ja proovi fluorestsentskujutise jälgimine objektiivi ja okulaari süsteemi võimendamise teel.
