Erinevus laserkonfokaalse mikroskoobi ja traditsioonilise optilise mikroskoobi vahel
Laser-skaneeriv konfokaalne fluorestsentsmikroskoopia on suhteliselt arenenud molekulaar- ja rakubioloogia analüüsiinstrument, mis kasutab bioloogiliste proovide kolmemõõtmeliste andmete saamiseks arvuti-, laser- ja pilditöötlustehnoloogiat. Seda kasutatakse peamiselt elusrakkude struktuuri ja konkreetsete molekulide ja ioonide bioloogiliste muutuste jälgimiseks, kvantitatiivseks analüüsiks ja reaalajas kvantitatiivseks määramiseks.
Laserkonfokaalse mikroskoopia põhimõte: kasutage punktivalgustuse ja punkti tuvastamise teostamiseks valgusallika taga asuvat valgustusava ja detektori ette asetatud tuvastusava. Valgusallikast läbi valgustusava eralduv valgus fokusseeritakse proovi fookustasandil olevale punktile ja sellest punktist kiiratav fluorestsents kuvatakse tuvastusnõelaaugule ning mis tahes väljaspool seda punkti kiirgav valgus blokeeritakse tuvastusega. nõelaauk. Valgustuse nõelaauk ja tuvastusnõelaauk on konjugeeritud kiiritatud punktiga või tuvastatud punktiga, seega on tuvastatud punkt konfokaalpunkt ja tasapind, kus tuvastatud punkt asub, on konfokaalne tasand.
Arvuti kuvab tuvastatud punktid arvutiekraanil pildipunktide kujul. Täieliku kujutise genereerimiseks skannib optilise tee skaneerimissüsteem proovi fookustasandil, et luua täielik konfokaalne kujutis. Niikaua kui lava liigub mööda Z-telge üles ja alla, viiakse proovi uus kiht konfokaaltasandile ja proovi uus kiht kuvatakse monitoril. Z-telje pideva liikumisega on võimalik saada proovi erinevatest kihtidest pidevaid pilte. Kerge lõikega pilt.
Erinevus traditsiooniliste valgusmikroskoopide vahel
Traditsioonilistel fluorestsentsmikroskoopidel on ületamatu puudus: fookustasandist väljapoole jäävad fluorestseeruvad struktuurid on hägused ja hägused. Põhjus on selles, et enamikul bioloogilistel isenditel on kattuvad struktuurid. Kui fluorestsentsmärgistatud struktuurid on jaotunud erinevatel tasanditel ja kattuvad, võtab objektiivi lääts vastu ka fookustasandist ülevalt või altpoolt hajutatud fluorestsentsi ning fluorestsentsmikroskoobi eraldusvõime paraneb oluliselt. vähendada.
Traditsiooniliste optiliste mikroskoopide põhjal kasutavad laserskaneerivad konfokaalsed mikroskoobid valgusallikana laservalgust, kasutavad konjugeeritud teravustamise põhimõtet ja seadet ning kasutavad vaadeldavate objektide digitaalseks pilditöötluseks, vaatluseks, analüüsiks ja väljastamiseks arvuteid. Proovi saab tomograafiliselt skaneerida ja pildistada rakkude kolmemõõtmelise ruumilise struktuuri mittepurustavaks vaatluseks ja analüüsiks. Samal ajal, kasutades immunofluorestsentsmärgistust ja ioonfluorestsentsmärgistussonde, saab see tehnoloogia mitte ainult jälgida fikseeritud rakke ja koelõike, vaid teostada ka reaalajas dünaamilist vaatlust ja elusrakkude struktuuri, molekulide, ioonide ja elutegevuse tuvastamist, subtsellulaarsel tasandil Füsioloogiliste signaalide, nagu Ca2 plus, pH väärtus, membraanipotentsiaal ja muutused raku morfoloogias, jälgimine on saanud uue põlvkonna võimsateks uurimisvahenditeks morfoloogia, molekulaarrakubioloogia, neuroteaduse, farmakoloogia ja geneetika valdkondades.
