Erinevus fluorestsents- ja laserkonfokaalse mikroskoopia vahel
fluorestsentsmikroskoop
1. Fluorestsentsmikroskoop on seade, mis kasutab ultraviolettvalgust valgusallikana testitava objekti valgustamiseks, põhjustades selle fluorestsentsi kiirgamist ning seejärel jälgib objekti kuju ja asendit mikroskoobi all. Fluorestsentsmikroskoopiat kasutatakse ainete imendumise, transpordi, jaotumise ja lokaliseerimise uurimiseks rakkudes. Mõned rakkudes olevad ained, näiteks klorofüll, võivad pärast ultraviolettkiirgusega kokkupuudet kiirata fluorestsentsi; Mõned ained ise ei pruugi fluorestsentsi kiirata, kuid fluorestseeruvate värvainete või fluorestseeruvate antikehadega värvituna võivad nad kiirata ka ultraviolettkiirguse mõjul fluorestsentsi. Fluorestsentsmikroskoopia on üks vahendeid nende ainete kvalitatiivseks ja kvantitatiivseks uurimiseks.
2. Fluorestsentsmikroskoobi põhimõte:
(A) Valgusallikas: valgusallikas kiirgab erineva lainepikkusega valgust (ultravioletsest infrapunani).
(B) Ergastusfiltri valgusallikas: konkreetse lainepikkusega valguse edastamine, mis võib tekitada proovis fluorestsentsi, blokeerides samal ajal valguse, mis on ergastusfluorestsentsi jaoks kasutu.
(C) Fluorestseeruvad proovid: tavaliselt värvitud fluorestseeruvate pigmentidega.
(D) Blokeeriv filter: edastab selektiivselt fluorestsentsi, blokeerides ergastusvalguse, mida proov ei ole neeldunud, ja mõned lainepikkused edastatakse selektiivselt ka fluorestsentsis. Mikroskoop, mis kasutab kiiritatud objektist fluorestsentsi kiirgamiseks valgusallikana ultraviolettvalgust. Elektronmikroskoobi panid esmakordselt kokku Knorr ja Harroska Saksamaal Berliinis 1931. aastal. Seda tüüpi mikroskoobis kasutatakse valguskiire asemel kiiret elektronkiirt. Kuna elektronide voo lainepikkus on valguslainetega võrreldes palju lühem, võib elektronmikroskoobi suurendus ulatuda 800000 korda, minimaalse eraldusvõime piiriga 0,2 nanomeetrit. Skaneeriv elektronmikroskoop, mida hakati kasutama 1963. aastal, võimaldab inimestel näha objektide pinnal olevaid tillukesi struktuure.
3. Kasutusala: kasutatakse väikeste objektide kujutiste suurendamiseks. Tavaliselt kasutatakse bioloogia, meditsiini, mikroskoopiliste osakeste jms vaatlemiseks.
konfokaalne mikroskoop
1. Konfokaalne mikroskoop lisab peegeldunud valguse teele poolpeegeldava läätse, mis painutab juba läätse läbinud peegeldunud valgust teistes suundades. Selle fookuspunktis on deflektor, mille fookuspunktis on auk ja väike auk asub fookuspunktis. Deflektori taga on fotokordisti toru. Võib ette kujutada, et enne ja pärast tuvastusvalguse fookuspunkti peegeldunud valgust ei saa selle konfokaalse süsteemi kaudu väikesele avale fokusseerida ja deflektor blokeerib selle. Seega mõõdab fotomeeter fookuspunktis peegeldunud valguse intensiivsust.
2. Põhimõte: traditsioonilised optilised mikroskoobid kasutavad väljavalgusallikaid ja proovi iga punkti kujutist mõjutab difraktsioon või hajutatud valgus naaberpunktidest; Laser-skaneeriv konfokaalne mikroskoop kasutab laserkiirt punktvalgusallika moodustamiseks läbi valgustatud nööpnõela augu, et skaneerida proovi fookustasandi kõiki punkte. Proovi valgustatud punkt kuvatakse tuvastusnõelaaugus ja fotokordisti toru (PMT) või termoelektriline sidestusseade (cCCD) võtab selle punkt-punkti või rea haaval vastu pärast tuvastamisnõela avamist, moodustades arvutimonitoril kiiresti fluorestseeruva kujutise. ekraan. Valgustusava ja tuvastusnõelaauk on konjugeeritud objektiivi fookustasandi suhtes. Fookustasandil olevad punktid fokusseeritakse samaaegselt valgustusnõelaaugule ja emissiooninõelaaugule ning fookustasandist väljapoole jäävaid punkte tuvastusnõelaaugus ei kuvata. Selle tulemuseks on konfokaalne kujutis, mis esindab proovi optilist ristlõiget, ületades tavapärase mikroskoopia uduste kujutiste puuduse.
3. Kasutusvaldkonnad: meditsiin, looma- ja taimeuuringud, biokeemia, bakterioloogia, rakubioloogia, koe ja embrüo, toiduaineteadus, geneetika, farmakoloogia, füsioloogia, optika, patoloogia, botaanika, neuroteadus, merebioloogia, materjaliteadus, elektroonikateadus, mehaanika, naftageoloogia ja mineraloogia.
