Mikroskoobi põhistruktuur ja õliläätse tööpõhimõte
Kaasaegsed üldoptilised mikroskoobid kasutavad kujutise suurendamiseks kahe läätse, okulaari ja objektiivi süsteemi, ning neid nimetatakse sageli liitmikroskoopideks. Need koosnevad kahest põhiosast: mehaanilisest seadmest ja optilisest süsteemist. Mikroskoobi optilises süsteemis on objektiiviläätse jõudlus kõige kriitilisem, mis mõjutab otseselt mikroskoobi eraldusvõimet. Üldistes optilistes mikroskoopides tavaliselt kasutatavate mitut tüüpi objektiiviläätsede hulgas on õliläätsel suurim suurendus ja see on mikrobioloogiliste uuringute jaoks kõige olulisem. Võrreldes teiste objektiividega on õliläätsede kasutamine erilisem, slaidi ja läätse vahele tuleb lisada tilk peegelõli, mis tuleneb peamiselt kahest järgmisest aspektist:
1. suurendage õlipeegli suurenduse valgustuse heledust kuni 100 Χ, nii suure objektiivi suurendus, fookuskaugus on väga lühike, läbimõõt on väga väike, kuid vajalik valguse intensiivsus on suurim. Alates slaidi näidiste kandmisest läbi valguse ei pääse osa valgusest erineva tiheduse tõttu (slaidilt õhku ja seejärel läätsesse) valguse murdumise või täieliku peegelduse tõttu läätsesse, mistõttu õlipeegli kasutamisel on valguse vähenemise tõttu objekti pilt selge. Nii et selleks, et valgust mitte läbi kadu teha, tuleb õlipeegli kasutamisel õlipeegli ja slaidi vahele lisada õlipeegliga sarnase klaasi murdumisnäitaja (n=1.55) (tavaliselt seedriõliga, selle murdumisnäitaja n=1,52).
2. Suurendage mikroskoobi eraldusvõimet Mikroskoobi lahutusvõime ehk lahutusvõime on mikroskoobi võime tuvastada kahe punkti vaheline minimaalne kaugus. Füüsikalisest vaatenurgast on optilise mikroskoobi eraldusvõime piiratud interferentsi nähtuse ja kasutatava objektiivi jõudluse tõttu. Lahutusvõimsust D saab väljendada järgmiselt: D=λ/2N.A, kus λ=valguslaine lainepikkus; NA=objektiivi ava numbriline väärtus. Optilise mikroskoobi valgusallikas ei ole võimalik väljaspool nähtava valguse lainepikkuste vahemikku (0.4 - 0,7 μm), samas kui avaarvu numbriline väärtus sõltub peegli suunurga objektiivist ja murdumisnäitajatest slaidi ja läätse vahelise keskkonna indeks, mida saab väljendada järgmiselt: NA=n × sin, milles on pool valguse maksimaalsest langemisnurgast. See sõltub objektiiviläätse läbimõõdust ja fookuskaugusest, praktikas võib maksimum ulatuda vaid 120 O-ni ja kandja murdumisnäitaja n-ni. Kuna seedriõli murdumisnäitaja (1,52) on suurem kui õhu ja vee murdumisnäitaja (vastavalt 1.0 ja 1,33), mistõttu seedriõli on läätses slaidis keskmise õlipeegel võib saavutada arvulise ava väärtuse (NA on tavaliselt 1.{17}}.4), mis on kõrgem kui madala suurendusega objektiiv, suure suurendusega objektiiv, näiteks kuivpeegel (NA on madalam kui 1. 0). Kui nähtava valguse keskmine lainepikkus on 0,55 μm, suudab suure suurendusega objektiiv numbrilise avaga 0,65 eristada ainult objekte, mis asuvad vähemalt 0 kaugusel. 4 μm, samas kui õlipeegli eraldusvõime võib olla umbes 0,2 μm.
