Fluorestsentsmikroskoobi kasutamise oskused ja meetodid
Fluorestsentsmikroskoobi tehnilised parameetrid 1. Lainurk-okulaar 2. Akromaatiline objektiiv 3. Nelja auguga objektiivi muundur 4. Emiteeriv fluorestsentsseade sinine (b) roheline (g) ergastussüsteem 100W elavhõbedalamp 5. Koaksiaalne jäme mikrofookusmehhanism: teravustamisulatus 15 mm, mikrovõre väärtus 0,002 mm 6. Kahekihilise mehaanilise töölaua pikisuunaline liikumisulatus: 70 mm, külgsuunaline liikumisulatus: 50 mm.
Fluorestsentsmikroskoobi kasutamise oskused ja meetodid
(1) slaidid
Slaidi paksus peaks olema vahemikus 0.8-1,2 mm kuni 1,2 mm. Liiga paks objektiklaas ei neela ühest küljest palju valgust ja teisest küljest ei pane ergutusvalgust proovile kogunema. Objektiklaas peab olema sile, ühtlase paksusega ja ilma ilmse spontaanse fluorestsentsita. Mõnikord on vaja Shi Yingi klaasliugusi.
(2) Katteklaas
Katteklaas on umbes 0,17 mm paksune ja sile. Ergastusvalguse võimendamiseks võib kasutada ka interferentsi katteklaasi, mis on omamoodi spetsiaalne katteklaas, millel on mitu ainekihti (näiteks magneesiumfluoriid), millel on erinevatel valguse lainepikkustel erinev interferents. See võib panna fluorestsentsi sujuvalt läbima ja peegeldama ergastusvalgust ning see peegeldunud ergastusvalgus võib proovi ergutada.
(3) Eksemplarid
Koelõigud või muud proovid ei tohiks olla liiga paksud. Kui see on liiga paks, kulub suurem osa ergastusvalgusest katsekeha alumises osas, samas kui objektiiviläätse poolt otseselt vaadeldav ülemine osa pole täielikult ergastatud. Lisaks mõjutab otsustusvõimet rakkude kattumine või lisandi maskeerimine.
(4) tihendusaine
Tihendusainena kasutatakse tavaliselt glütserooli, mis peab olema värvitu ja läbipaistev, ilma spontaanse fluorestsentsita. Fluorestsentsi heledus on ere pH 8,5–9,5 juures ja seda ei ole lihtne kiiresti tuhmuda. Seetõttu kasutatakse tihendusainena sageli samaväärset glütserooli ja 0,5 mol/l PH9.0 ~ 9,5 karbonaatpuhvri segu.
(5) peegliõli
Tavaliselt tuleb proovide vaatlemisel tumevälja fluorestsentsmikroskoobi ja õlipeegliga kasutada peegelõli. Parim on kasutada spetsiaalset mittefluorestseeruvat peegliõli või selle asemel võib kasutada ülaltoodud glütseriini. Võib kasutada ka vedelat parafiini, kuid murdumisnäitaja on madal, mis mõjutab veidi pildikvaliteeti.
