Mitmed märkused ja näpunäited faasikontrastmikroskoopia kasutamiseks
Faaskontrastmikroskoopia kasutamine
1) Paigaldage faasikontrastseade: eemaldage tavalise mikroskoobi kondensaatori lääts ja paigaldage rõngakujulise diafragmaga kondensaatori lääts sobivale mikroskoobile; eemaldage mikroskoobi tavaline objektiiv ja asendage see faasiplaadiga objektiiviga; asendage okulaar faasikontrastmikroskoopide teravustamisokulaaridega; spetsiaalsed rohelised filtrid (mõnikord pole vajalikud) asetatakse valgusallika valguse sissepääsu juurde.
2) Valguse joondamine ja teravustamine: Reguleerige teravustamisokulaari ja paksuse reguleerimiskruvi, kuni vaateväljas on selgelt näha valge ring ja must ring. Must ring on fikseeritud ja valget ringi saab liigutada, reguleerides kondensaatori kruvi, nii et must ring ja valge ring langevad täielikult kokku. Eemaldage teravustamisokulaar ja asendage see kontrollimiseks mikroskoobi originaalokulaariga.
Faaskontrastmikroskoobi kasutamise probleemide analüüs
1. Proovi paksuse mõju Faaskontrastvaatluse läbiviimisel peaks proovi paksus olema 5 μm või õhem. Paksema proovi kasutamisel on proovi ülemine kiht väga selge, kuid sügav kiht on hägune ja põhjustab faasinihke häireid. ja valguse hajumine.
2. Katteklaasi ja klaasklaasi mõju Näidis peab olema kaetud katteklaasiga, vastasel juhul on rõngakujulise diafragma hele rõngas ja faasiplaadi tume rõngas raskesti kattuvad. Faasikontrastsuse vaatlusel on kõrged nõuded ka liugklaasi ja katteklaasi klaasi kvaliteedile. Kriimustuste, ebaühtlase paksuse või ebatasasuste korral ilmnevad ereda rõnga moonutused ja faasihäired. Lisaks, kui liug on liiga paks või liiga õhuke, muutub rõngakujulise diafragma hele rõngas suuremaks või väiksemaks.
3. Halo ja hääbumisefekt Faasikontrastmikroskoobi pildistamisprotsessis, kui teatud struktuur muutub faasiviivituse tõttu tumedaks, ei ole see valguse kadu, vaid valguse ümberjaotumise tulemus pilditasandil. Nii et valgus, mis on nähtavasti kadunud tumedates piirkondades, ilmub tumedamate objektide ümber ereda halona. See on faasikontrastmikroskoopia puudus, mis takistab peenstruktuuride vaatlemist ja halo nähtus on tõsisem, kui rõngakujuline diafragma on väga kitsas. Teine nähtus faasikontrastmikroskoopias on varjutusefekt, mis viitab kontrasti kadumisele suurema ala servades sama faasi viivitusega, kui seda vaadeldakse faasikontrastsuse järgi.
4. Faasi inversioon Kui n'n, on pildi hele ja tume kontrast just vastupidine, mida nimetatakse faasiinversiooniks. See on tundmatu, kui faaside erinevus δ=0 ja kontrastsus suureneb δ suurenemisega ning faasiinversioon ilmneb, kui δ jätkab suurenemist teatud väärtuseni. 90 protsenti kõrge neeldumisväärtusega (kõrge kontrastsusega) objektiivi kasutamisel on see teisendusväärtus umbes 0,55 λ ja 70 protsendi standardse neeldumisväärtusega objektiivi kasutamisel on see umbes 0,33 λ . Väiksemate optilise tee erinevuste lahendamiseks tuleks kasutada kõrgema neeldumisväärtusega eesmärke.
