Fluorestsentsmikroskoopia põhimõtted, omadused ja kasutamine
Fluorestsentsmikroskoobi põhimõte ja struktuuriomadused: Fluorestsentsmikroskoobis kasutatakse kõrge valgustõhususega punktvalgusallikat, mis kiirgab läbi värvifiltrisüsteemi teatud lainepikkusega valgust (nt ultraviolettvalgus 3650 tolli või ultraviolett sinine valgus 4200 tolli). ergastav valgus. Proovis sisalduvat fluorestsentsainet ergastatakse, et kiirata erinevaid fluorestsentsi värve, ning seejärel vaadeldakse objektiivi ja okulaari suurendamise teel. Sel viisil on see isegi nõrga fluorestsentsi korral kergesti äratuntav ja väga tundlik tugeva kontrastse tausta korral, mida kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsioonide ning keemilise koostise uurimiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur koosneb tavalisest optilisest mikroskoobist ja mõnedest tarvikutest (nagu fluorestsentsvalgusallikas, ergastusfilter, bikromaatiline kiire eraldaja ja blokeeriv filter jne). Luminofoorvalgusallikad – tavaliselt kasutatakse ülikõrgsurve elavhõbedalampe (50-200W), mis võivad kiirata erineva lainepikkusega valgust. Kuid igal fluorestseeruval ainel on ergastusvalguse lainepikkus, mis tekitab kõige tugevama fluorestsentsi, seega tuleb lisada ergastusfiltrid (tavaliselt ultraviolett-, lilla-, sinised ja rohelised ergastusfiltrid), et võimaldada ainult teatud lainepikkusega ergastusvalgust läbida ja valgustada. proovi, neelates samal ajal kogu muu valguse. Pärast ergastatud valgusega kiiritamist kiirgab iga aine väga lühikese aja jooksul nähtavat fluorestsentsi pikema lainepikkusega kui kiiritamine. Fluorestsentsil on spetsiifilisus ja see on üldiselt nõrgem kui ergastusvalgus. Spetsiifilise fluorestsentsi jälgimiseks tuleb objektiivi taha lisada blokeeriv (või summutav) filter.
Sellel on kaks funktsiooni: esiteks neelab ja blokeerib ergastava valguse okulaari sisenemise, et vältida fluorestsentsi häirimist ja silmade kahjustamist; teiseks, see valib ja võimaldab läbida spetsiifilist fluorestsentsi, kuvades konkreetse fluorestsentsi värvi. Mõlemat tüüpi filtrid tuleb valida koos kasutamiseks.
