Bioloogiliste proovide ettevalmistamine ja vaatlemine elektronmikroskoopia jaoks
Mikroskoobi lahutusvõime sõltub kasutatava valguse lainepikkusest, elektronmikroskoop hakkas ilmuma 1933. aastal on tingitud elektronkiire nähtavast valgusest palju lühema lainepikkuse kasutamisest valgusallikana, nii et eraldusvõime see võib saavutada kui optiline mikroskoop oluliselt paranenud. Erinevad valgusallikad määravad ka elektronmikroskoobi ja optilise mikroskoobi erinevused.
Vastavalt elektronkiire kujutise printsiibi erinevustele ja proovi rollile erinevatel viisidel on kaasaegne elektronmikroskoop välja töötatud mitmete tüüpide moodustamiseks, praegu * kasutatakse tavaliselt ülekandeelektronmikroskoopi ja skaneerivat elektroni. mikroskoobi puhul võib esimene olla vahemikus 1,000-1,000,000 korda muutuste vahemiku kogusuurendus, viimane võib olla { kogusuurenduses {4}}, 000 korda vaheliste muutuste kogusuurendus. See katse keskendub proovide ettevalmistamisele kahte tüüpi mikroskoobi, transmissioonielektronmikroskoobi ja skaneeriva elektronmikroskoobi jaoks.
Materjalid
1. Tüvi Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) kaldu.
2. Lahused või reaktiivid Amüülatsetaat, kontsentreeritud väävelhape, veevaba etanool, steriilne vesi, 2% naatriumfosfovolframhape (pH 6.5-8.0) vesilahus, 0,3% polüvinüülformaldehüüdi (lahustunud triklorometaanis) lahus, tsütokroom c, ammooniumatsetaat, plasmiid pBR322.
3. Instrumendid või muud tarvikud Tavaline optiline mikroskoop, vaskvõrk, portselanist lehter, keeduklaas, lame tass, steriilne bürett, steriilsed pintsetid, lantsett, slaidid, ** loendusplaat, vaakumkatteseade, kriitilise punkti kuivati jne.
Toimingu sammud
(I) Proovi ettevalmistamine ja ülekandeelektronmikroskoopia jälgimine
1. Metallvõrgu töötlemine
Optilise mikroskoopia proovid asetatakse vaatlemiseks objektiklaasidele. Kuid transmissioonelektronmikroskoopias, kuna elektronid ei suuda klaaslehte läbi tungida, saab kandjana kasutada ainult võrkmaterjali, mida tavaliselt nimetatakse kandevõrguks. Kandurvõrku saab erinevate materjalide ja kuju tõttu jagada paljudeks erinevateks spetsifikatsioonideks, millest * on tavaliselt kasutatav vaskvõrk 200-400 (aukude arv). Vaskvõrku tuleks enne kasutamist töödelda, et eemaldada sellelt mustus ja hoida see puhtana, vastasel juhul mõjutab see tugikile kvaliteeti ja näidiste fotode selgust. Selles katses kasutatud vaskvõrk on 400 mešši, mida saab töödelda järgmiselt: esiteks pleegitage seda paar tundi amüülatsetaadiga, seejärel loputage seda mitu korda destilleeritud veega ja seejärel pleegitage seda veevabas etanoolis. dehüdratsioon. Kui vaskvõrk ei ole ülaltoodud meetodil ikka veel puhas, võib seda kasutada kontsentreeritud väävelhappe (1:1) lahjendamiseks 1–2 minuti jooksul või 1% NaOH lahuses, mida keedetakse mitu minutit, loputatakse mitu korda destilleeritud veega. , mis asetatakse veevaba etanooli dehüdratsiooni, tuleb kasutada.
2. Tugikile valmistamine
Proovivaatlusel tuleks kandevõrgus katta ka struktureerimata ühtlase kile kihiga, vastasel juhul lekivad kandevõrgu aukudest välja väikesed proovid, seda kilekihti nimetatakse tavaliselt tugikileks või kandekileks. Tugikile peaks olema elektronidele läbipaistev ja selle paksus peaks üldiselt olema alla 20 nm; elektronkiire mõjul peaks kilel olema ka teatav mehaaniline tugevus, see suudab säilitada konstruktsiooni stabiilsuse ja sellel on hea soojusjuhtivus; lisaks ei tohiks tugivõrgul olla elektronmikroskoobi all nähtavat struktuuri ja see ei reageeri kaasasoleva prooviga keemiliselt ega sega proovi jälgimist ning selle paksus on üldiselt umbes 15 nm. Tugikile võib olla valmistatud plastikkilest (nt tulepuuvillakile, polüetüleenformaldehüüdkile jne), süsinikkilest või metallkilest (nt berülliumkile vms). Rutiinsetes töötingimustes saab nõudeid täita plastkilega, samas kui tulepuuvillase kleepkilega plastkile valmistamine on suhteliselt lihtne, kuid tugevus pole nii tugev kui polüetüleenformaldehüüdkilel.
