Mikroskoopilise pildistamise klassiruum 丨Laivälja fluorestsentsmikroskoop
Elusrakkude pildistamise rakendustes hõlbustab laivälja fluorestsentsmikroskoopia mikroskoobi staadiumile paigutatud spetsiifilistes keskkonnakambrites kasvatatud kleepuvate rakkude dünaamika jälgimist. Kõige elementaarsemas konfiguratsioonis on standardne EPI fluorestsentsvalgustusega varustatud pöördkoekultuuri mikroskoop ühendatud ala massiivi detektorsüsteemiga (tavaliselt CCD-kaamera), sobivate fluorestsentsfiltrite ja katikusüsteemiga, et piirata rakkude liigset kokkupuudet kahjuliku ergastusvalgusega. . Põhiline fluorestsentsmikroskoopia tugineb hoolikalt sobitatud interferentsifiltritele, et valida konkreetsed ribalaiused valgustamiseks ja kiirgava valguse tuvastamiseks. Valgusallikate hulka kuuluvad elavhõbeda-, ksenoon- ja metallhalogeniidkaarlambid, kiirt laiendavad lasersüsteemid ja valgusdioodid (LED), mis kõik nõuavad erinevaid filtri spetsifikatsioone. Fluorestsentsmikroskoopias kasutatavate sünteetiliste fluorofooride emissioonispektrid katavad peaaegu ultraviolettkiirguse, nähtava ja infrapunase piirkonna. Geneetiliselt kodeeritud fluorestseeruvate valkude kasutamine on oluliselt laiendanud fluorestsentsmikroskoopia võimalusi elusrakkude pildistamisel, võimaldades teadlastel täpselt sihtida huvipakkuvaid subtsellulaarseid piirkondi.
Nuohai LS 18, uut tüüpi valguslehtvalgustusmikroskoop, mille on iseseisvalt välja töötanud Nuohai, on spetsiaalselt loodud läbipaistvate suurte koeproovide kõrge eraldusvõimega 3D-pildistamiseks ning on pühendatud erinevate tervete kudede, nagu aju, põrn, peensool, uurimisele. , neerud, kopsud, süda ja kasvaja. Elundite 3D täpne struktuur.
Laivälja fluorestsentsi korral maksimeerib mikroskoobi objektiivi kogutud täisava emissioon salvestatud signaali, minimeerides samal ajal nõutava särituse aja. Seega saab proove pildistada väga lühikeste valgusperioodidega. Laiväljakujundamise peamiseks puuduseks on see, et fookustasandist kaugel asuvatest piirkondadest tulev fluorestsents ja taustsignaal on soovimatu valgus, mis sageli varjab huvipakkuvaid funktsioone. Seetõttu annab laiväljakujundamine parimaid tulemusi, kui huvipakkuvad tunnused on suured (nt organellid) või loomult väga täpilised. Lai valik elusrakkude proove, sealhulgas kleepunud rakud, bakterid, pärm ja väga õhukesed koelõigud, on ideaalsed kandidaadid laivälja fluorestsentskujutiseks, kuid paksemaid kudesid (üle 5 mikroni) on kõige parem kasutada täiustatud meetodiga pildistamisel.
Kuigi sünteetiliste fluorestseeruvate värvide, kvantpunktide ja fluorestseeruvate valkudega fluorestsentspildis on tehtud palju edusamme, on mõnel juhul kasulik kombineerida fluorestsentsi muude pildistamisviisidega. Näiteks saab DIC-d kasutada koos laivälja fluorestsentsiga, et jälgida rakkude elujõulisust ja üldist morfoloogiat, uurides samal ajal spetsiifiliste märgistatud sihtmärkide jaoks huvipakkuvaid nähtusi. DIC-i ja fluorestsentsi hankimine ühel pildil on tavaliselt ebapraktiline, kuid õigesti konfigureeritud mikroskoobis saab neid kahte tehnikat kasutada järjestikku. Seega saab pärast epifluorestsentsrežiimis pildistamist saada DIC-pilte fluorestseeruvalt märgistatud proovidest, kasutades läbivat valgust. Neid kahte pilti saab järelanalüüsi käigus liita. DIC- ja fluorestsentskujutiste samaaegne saamine on võimalik täiustatud laiväljamikroskoobi konfiguratsioonides, kasutades spektraalselt eraldatud valgustust (näiteks nähtavat ja lähiinfrapuna) ning kahe kaameraga või jagatud vaatega kaamera adaptereid. Enamikus laserskaneerivates konfokaalsetes mikroskoopides saab pilte saada samaaegselt nii fluorestsents- kui ka DIC-režiimis, välistades vajaduse hankimisjärgse töötlemise järele. Faasikontrasti ja Hoffmani modulatsioonikontrasti saab kasutada ka koos laivälja fluorestsentsmikroskoopiaga. Kuid nende tehnikate puhul on objektiivi objektiiv eriline, olgu selleks faasirõngas või Hoffmani modulatsiooniplaat, see põhjustab emissiooni intensiivsuse vähenemise 5-15 protsenti.
Artikli link: Instrument Equipment Network https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
