Mikroobide koguse mõõtmine – mikroskoopiline otseloendamise meetod!
Bakteripopulatsioonide kasvu iseloomustab rakkude arvu suurenemine või rakulise materjali suurenemine. Rakkude arvu mõõtmiseks on mitu meetodit, sealhulgas otsene mikroskoopiline loendus, plaatide arv, turbomeetria spektrofotomeetriga, kõige tõenäolisem arv MPN ja membraanfiltreerimine. Rakuliste ainete mõõtmise meetodid hõlmavad rakkude kuivmassi mõõtmist, rakkude teatud komponentide (nt lämmastiku, RNA ja DNA) sisalduse mõõtmist ning ainevahetusproduktide mõõtmist. Kokkuvõtlikult võib öelda, et mikroobide kasvu mõõtmiseks on palju meetodeid, millest igaühel on omad eelised ja puudused ning valiku tegemisel tuleks lähtuda konkreetsetest töös esitatavatest nõuetest. See katse tutvustab peamiselt tootmises ja teaduslikus uurimistöös levinud mikroskoobi otseloendamise meetodit.
Eesmärgi nõuded
1. Selgitage vererakkude loenduslaua kasutamise põhimõtet.
2. Omandage vererakkude loenduslaua kasutamise meetod mikroobide loendamiseks.
2, Põhiprintsiibid
Mikroskoopiline otseloendusmeetod on lihtne, kiire ja intuitiivne meetod väikese koguse proovi suspensiooni vahetuks loendamiseks mikroskoobi all, asetades selle teatud pindala ja mahuga spetsiaalsele slaidile (tuntud ka kui bakteriloendur). Praegu on kodus ja välismaal tavaliselt kasutatavad bakteriloendusseadmed vererakkude loendusplaadid, Peteroff Hauseri bakteriloendusseadmed ja Hawksley bakteriloendusseadmed, mida kõiki saab kasutada pärmi, bakterite, seente eoste jne suspensioonide loendamiseks. sama põhimõttega. Viimase kahe tüüpi bakteriloendurite kogumaht on pärast katteklaasiga katmist {{0}},02 mm3 ning katteklaasi ja kandeklaasi vaheline kaugus on vaid 0,02 mm. Seetõttu saab väiksemate rakkude, näiteks bakterite, vaatlemiseks ja loendamiseks kasutada õlikümblusobjektiivi. Lisaks nende bakteriloendurite kasutamisele on olemas ka hindamismeetod, mille abil saab mikroskoobi all vahetult jälgida määrdumise pindala ja põllu pindala suhet, mida tavaliselt kasutatakse piima bakterioloogiliseks uurimiseks. Mikroskoobiga otsese loendamise eelised on intuitiivsed, kiired ja hõlpsasti kasutatavad. Kuid selle meetodi puuduseks on see, et mõõdetud tulemused on tavaliselt surnud ja elusrakkude summa. Praegu on mõned meetodid, mis võivad selle puuduse ületada, näiteks elusrakkude värvimiskambri kultuuri kombineerimine (lühiajaline) ja rakkude jagunemise inhibiitorite lisamine, et saavutada ainult elusrakkude loendamise eesmärk.
Vererakkude loenduslaua kasutamine näitena otseseks loendamiseks mikroskoobi all. Ülejäänud kahe bakteriloenduri kasutusviisid leiate erinevate tootjate juhenditest. Mikroskoobi all olev otseloendamine vererakkude loendusplaadi abil on tavaliselt kasutatav mikroobide loendamise meetod. Loenduslaud on spetsiaalselt valmistatud klaasist liug, millel on neli soont, mis moodustavad kolm platvormi; Keskel asuv laiem platvorm on lühikese horisontaalse soonega jagatud kaheks pooleks ning platvormi mõlemal küljel on võre. Iga ruudustik on jagatud üheksaks suureks ruudustikuks ja keskel asuv suur ruudustik on loendusruum. Vererakkude loendusplaadi struktuur on näidatud joonisel l{{0}}. Loendusruumi skaalal on üldiselt kaks spetsifikatsiooni. Üks on see, et suur ruut on jagatud 25 keskmiseks ruuduks ja iga ruut on jagatud veel 16 väikeseks ruuduks (joonis 15-2); Teine meetod on jagada suur ruut 16 keskmiseks ruuduks ja iga ruut jagatakse edasi 25 väikeseks ruuduks. Kuid olenemata loenduslaua suurusest on igas suures ruudus 400 väikest ruutu. Kui iga ruudu külje pikkus on 1 mm, on iga suure ruudu pindala lmm2. Peale katteklaasiga katmist on katteklaasi ja slaidi vaheline kõrgus 0,1mm, seega on loendusruumi maht 0,1mm3 (tuhandik milliliitrit). Joonis 15-1 Vererakkude loenduspaneeli struktuur (I) Joonis 15-2 Vererakkude loenduspaneeli struktuur (II) Eestvaade; B. Vertikaalne lõikevaade; Suurendatud ruudustiku keskel on loendusruumina suur ruut 1. Vererakkude loenduslaud; 2. Katteklaas; Loendusruumis loendamisel arvutatakse bakterite üldarv tavaliselt viie ruudu kohta, seejärel saadakse iga ruudu keskmine väärtus, mis korrutatakse 25 või 16-ga, et saada bakterite üldarv suures ruudus, mis seejärel teisendatakse bakterite üldarv lml bakterilahuses. Eeldades, et bakterite koguarv viies ruutruudustikus on A ja bakterilahuse lahjendustegur on B. Kui ruutruudustikus on 25 loendusplaati, on bakterite üldarv 1 ml bakterilahuses A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Samamoodi, kui ruutruudustikus on 16 loendusplaati, on bakterite koguarv 1 ml bakterilahuses A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
