Täiustatud laserskaneeriva multifotoni mikroskoopia eelised
Laserskaneeriv mitmefotoonmikroskoop on optilise mikroskoopia oluline edasiminek, peamiselt võime jälgida elusate ja fikseeritud rakkude ja kudede süvastruktuuri ning saada selgeid ja teravaid mitmekihilisi Z-tasandi struktuure, st optilisi lõikeid, millest saab konstrueerida proovikeha kolmemõõtmelise tahke struktuuri. Konfokaalne mikroskoopia kasutab laservalgusallikat, mida laiendatakse, et täita kogu objektiiviläätse tagumine fookustasapind, ja seejärel läbib objektiivi läätsesüsteemi, et koonduda proovi fookustasandil väga väikesteks täppideks. Sõltuvalt objektiivi numbrilisest avast on ereda valgustuspunkti läbimõõt umbes 0,25 ~ 0,8 μm ja sügavus umbes 0,5 ~ 1,5 μm. Konfokaalpunkti suuruse määravad mikroskoobi konstruktsioon, laseri lainepikkus, objektiiviläätse omadused, skaneerimisüksuse olekuseade ja proovi iseloom. Välimikroskoobidel on suur valgustusvahemik ja valgustussügavus, samas kui konfokaalmikroskoobid koondavad valgustuse fookustasandil ühte fookuspunkti. Konfokaalse mikroskoobi kõige põhilisem eelis on võime teha paksudest fluorestseeruvatest proovidest (kuni 50 μm või rohkem) peeneid optilisi lõike, mille osa paksus on umbes 0,5–1,5 μm. Mikroskoobi Z-telje samm-mootoriga proovi üles-alla liigutamisega saab saada mitmeid optilise lõike pilte. Kujutise teabe hankimist juhitakse esimesel tasapinnal ja seda ei sega proovi teistest kohtadest väljastatud signaalid. Pärast tausta fluorestsentsi mõjude eemaldamist ja signaali-müra suhte suurendamist on konfokaalse pildi kontrastsus ja eraldusvõime oluliselt paranenud võrreldes tavaliste väljavalgustusega fluorestsentskujutistega. Paljudes proovides põimuvad paljud keerukad konstruktsioonikomponendid, moodustades keerukaid süsteeme, kuid kui on võimalik hankida piisavalt optilisi sektsioone, saame need tarkvara abil kolmemõõtmeliselt rekonstrueerida. Seda eksperimentaalset meetodit on bioloogilistes uuringutes laialdaselt kasutatud rakkude või kudede vaheliste keerukate struktuursete ja funktsionaalsete suhete selgitamiseks.
