Sissejuhatus pöördmikroskoopide ja fluorestsentsmikroskoobide vahel valimisse
Mikroskoop on oluline vahend rakukultuuris ja sellega seotud tuletiskatsetes. Praegu on turul erinevat tüüpi mikroskoope ning vajadustele vastava ja sobiva mikroskoobi valimine on väljakutse. Allpool tutvustame lihtsaks valikuks pöördmikroskoopide ja fluorestsentsmikroskoopide põhimõtteid.
Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel mikroskoobil, mis koosneb peamiselt kolmest osast: mehaaniline osa, valgustusosa ja optiline osa. Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel püstisel mikroskoobil, välja arvatud see, et objektiivilääts ja valgustussüsteem on vastupidised, kusjuures esimene on lava all ja teine lava kohal. See struktuur võimaldab oluliselt suurendada efektiivset kaugust valgustuse teravustamissüsteemi ja lava vahel, muutes paksemate vaatlusinstrumentide, nagu kultiveerimisnõud ja rakukultuuripudelid, paigutamise lihtsamaks (muidugi on lubatud ka klaasklaasid), samas kui töökaugus objektiivi ja materjali vahel ei pea olema väga suur. Pöördmikroskoopi kasutavad meditsiini- ja tervishoiuasutused, ülikoolid ja uurimisinstituudid mikroorganismide, rakkude, bakterite, koekultuuride, suspensioonide, setete jms vaatlemiseks. See suudab pidevalt jälgida rakkude ja bakterite paljunemis- ja jagunemisprotsessi kultiveerimiskeskkonnas ning suudab selle protsessi käigus jäädvustada mis tahes olekut. Laialdaselt kasutatav sellistes valdkondades nagu tsütoloogia, parasitoloogia, onkoloogia, immunoloogia, geenitehnoloogia, tööstuslik mikrobioloogia, botaanika jne.
Fluorestsentsmikroskoopiat kasutatakse ainete imendumise, transpordi, jaotumise ja lokaliseerumise uurimiseks rakkudes. Testitava objekti puhul on fluorestsentsi tekitamiseks kaks võimalust: spontaanne fluorestsents, mis kiirgab vahetult pärast UV-kiirgust fluorestsentsi; Sekundaarne fluorestsents tekib siis, kui vaadeldavat objekti töödeldakse fluorestseeruvate värvainetega ja seejärel kiiritatakse ultraviolettvalgusega fluorestsentsi kiirgamiseks. Mõned rakkudes leiduvad ained, näiteks klorofüll, tekitavad ultraviolettkiirgusega kokkupuutel spontaanset fluorestsentsi; Mõned ained ise ei saa fluorestsentsi kiirata, kuid fluorestseeruvate värvide või fluorestseeruvate antikehadega värvimisel võivad nad kiirata ka sekundaarset fluorestsentsi pärast ultraviolettvalgusega kiiritamist. Fluorestsentsmikroskoop kasutab ülitõhusat punktvalgusallikat, et kiirata teatud lainepikkusega valgust (ultraviolettvalgus 365 nm või lilla sinine valgus 420 nm) läbi värvifiltrisüsteemi ergastusvalgusena, mis ergastab proovi sees olevaid fluorestseeruvaid aineid, et kiirgaks erinevat värvi fluorestsentsi, ning seejärel vaatleb objektiivi läbi okulaari suurenduse. Sel viisil on seda isegi nõrga fluorestsentsi korral tugeval taustal lihtne ära tunda ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri, funktsiooni ja keemilise koostise uurimiseks.
