Laser -skaneerimise mitmefotoonmikroskoopia täiustamine
Laseri skaneerimise multifotoonmikroskoop on optilise mikroskoopia oluline paranemine, mis avaldub peamiselt võimetes jälgida elavate rakkude, fikseeritud rakkude ja kudede sügavaid struktuure, ning saada selged ja teravad mitmekihilised Z-tasapinna struktuurid, nimelt optilised viilud, mida saab kasutada kolmemõõtmeliste tahkete ainete struktuuride ehitamiseks. Konfokaalne mikroskoop kasutab laservalgusallikat, mida laiendatakse, et täita kogu objektiivi fookustasand, ja seejärel koondatakse proovi fookustasapinna väga väikesteks punktideks objektiivi objektiivisüsteemi kaudu. Vastavalt objektiivi numbrilisele avale on hele valgustuspunkti läbimõõt umbes 0. 25-0. 8 μm ja sügavus on umbes 0. {7}}. 5 μm. Konfokaalse punkti suuruse määratakse mikroskoobi kujundus, laserlainepikkus, objektiivsed omadused, skaneerimise seadme sätted ja proovide omadused. Välja mikroskoobi valgustusvahemik ja sügavus on suured, konfokaalse mikroskoobi valgustamine on keskendunud fookustasapinna fookuspunktile. Konfokaalse mikroskoopia põhieelis on see, et see suudab paksude fluorestsentsproovidel teha peene optilise sektsiooni (kuni 5 0 μm või rohkem), paksusega umbes 0,5–1,5 μm. Seeria optiliste viilude pilte saab proovile ja allapoole liikudes mikroskoobi Z-telje astmemootori abil. Kujutisteabe kogumist kontrollitakse tasapinnas ja seda ei segata signaalid, mis kiirgavad proovide muudest positsioonidest. Pärast taustfluorestsentsi mõju eemaldamist ja signaali ja müra suhte suurendamist parandatakse konfokaalsete piltide kontrasti ja eraldusvõimet võrreldes traditsiooniliste välja valgustuse fluorestsentsi piltidega võrreldes märkimisväärselt. Paljudes proovides on keerulised konstruktsioonikomponendid keerukate süsteemide moodustamiseks põimunud, kuid kui piisavalt optilisi lõike saab koguda, saame tarkvara kasutada nende rekonstrueerimiseks kolmes mõõtmes. Seda eksperimentaalset meetodit on bioloogilistes uuringutes laialdaselt kasutatud rakkude või kudede keerukate struktuuriliste ja funktsionaalsete suhete selgitamiseks.
