Laserskaneeriva multifotoni mikroskoopia paremad eelised
Laser-skaneeriv multifotoonmikroskoopia on optilise mikroskoopia oluline edasiarendus, peamiselt elusrakkude, fikseeritud rakkude ja kudede süvastruktuuri vaatlemiseks ning võimaldab saada selgeid ja teravaid mitmekihilisi Z-tasandi struktuure, st optilisi viilusid, ning konstrueerida. Proovi kolmemõõtmeline tahke struktuur. Konfokaalne mikroskoop kasutab laservalgusallikat, mida laiendatakse, et täita kogu objektiivi tagumine fookustasapind, ja seejärel koondub läbi objektiivi läätsesüsteemi väga väikesesse punkti katsekeha fookustasandil. Sõltuvalt objektiiviläätse numbrilisest avast on eredaima valgustuspunkti läbimõõt umbes 0,25 ~ 0,8 μm ja sügavus umbes 0,5 ~ 1,5 μm. Konfokaalse punkti suurus sõltub mikroskoobi konstruktsioonist, laseri lainepikkusest, objektiivi omadustest, skaneerimisüksuse oleku seadistusest ja proovi iseloomust. Välimikroskoopidel on suur valgustusvahemik ja suur valgustussügavus, samas kui konfokaalsetel mikroskoopidel on valgustus, mis on koondunud fookustasandi fookuspunkti. Konfokaalse mikroskoopia kõige põhilisem eelis on see, et sellega saab teha paksude fluorestseeruvate proovide (kuni 50 μm või rohkem) peent optilist lõikamist, mille paksus on umbes 0,5–1,5 μm. Proovide mikroskoobi Z-telje samm-mootori abil üles-alla liigutamisega saab saada mitmeid optilise lõike pilte. Kujutise teabe hankimist juhitakse tasapinnas ja seda ei sega proovi teistest kohtadest pärit signaalid. Pärast tausta fluorestsentsi efekti eemaldamist ja signaali-müra suhte suurendamist on konfokaalsete kujutiste kontrastsus ja eraldusvõime oluliselt paranenud võrreldes traditsiooniliste väljavalgustuse fluorestsentskujutistega. Paljudes proovides on paljud keerulised konstruktsioonikomponendid omavahel põimunud, et moodustada keerukaid süsteeme, kuid kui on kogutud piisavalt optilisi sektsioone, saame need tarkvara abil 3D-s rekonstrueerida. Seda eksperimentaalset lähenemisviisi on bioloogilistes uuringutes laialdaselt kasutatud rakkude või kudede vaheliste keerukate struktuursete ja funktsionaalsete suhete selgitamiseks.
