Laserskaneerivate multifotomikroskoopide paremad eelised
Laserskaneeriv multifotoonmikroskoop on optilise mikroskoopia oluline edasiarendus, mis väljendub peamiselt võimes vaadelda elusrakkude, fikseeritud rakkude ja kudede süvastruktuurisid ning saada selgeid ja teravaid mitme{0}}kihilise Z-tasandi struktuure, nimelt optilisi viile, mida saab kasutada kolmemõõtmeliste tahkete struktuuride koostamiseks. Konfokaalne mikroskoop kasutab laservalgusallikat, mida laiendatakse, et täita kogu objektiiviläätse fookustasapind, ja seejärel koondub see läbi objektiivi läätsede süsteemi väga väikesteks punktideks proovi fookustasandil. Objektiivi objektiivi arvulise ava järgi on eredaima valgustuspunkti läbimõõt umbes 0,25-0,8 μm ja sügavus umbes 0,5-1,5 μm. Konfokaalpunkti suuruse määravad mikroskoobi konstruktsioon, laseri lainepikkus, objektiivi omadused, skaneerimisüksuse oleku sätted ja proovi omadused. Väljamikroskoobi valgustusulatus ja sügavus on suured, samas kui konfokaalse mikroskoobi valgustus on fokuseeritud fookustasandil asuvale fookuspunktile. Konfokaalse mikroskoopia põhieelis on see, et see suudab teha peent optilist lõikamist paksude fluorestseeruvate proovide puhul (kuni 50 μm või rohkem), mille paksus on ligikaudu 0,5–1,5 μm. Optiliste lõikude kujutiste seeriat saab saada, liigutades proovi üles ja alla, kasutades mikroskoobi Z-telje samm-mootorit. Kujutise teabe kogumist juhitakse * * tasapinnal, ilma proovi muudest kohtadest väljastatud signaalide segamiseta. Pärast tausta fluorestsentsi mõju eemaldamist ja signaali-müra suhte suurendamist on konfokaalsete kujutiste kontrastsus ja eraldusvõime oluliselt paranenud võrreldes traditsiooniliste väljavalgustuse fluorestsentskujutistega. Paljudes proovides põimuvad keerukad konstruktsioonikomponendid keerukate süsteemide moodustamiseks, kuid kui on võimalik koguda piisavalt optilisi sektsioone, saame tarkvara abil need kolmemõõtmeliselt rekonstrueerida. Seda eksperimentaalset meetodit on bioloogilistes uuringutes laialdaselt kasutatud rakkude või kudede vaheliste keerukate struktuursete ja funktsionaalsete suhete selgitamiseks.
