Fluorestsentsmikroskoopia ereda-välja ja tume-välja pildistamismeetodid
(1) BFI-meetod, mis võimaldab ainult paraksiaalpiirkonnas edastataval elektronkiirel läbida objektiivi ava, moodustades heledal taustal tumeda kujutise. Mida väiksem on objektiivi ava, seda suurem on ereda välja pildi kontrastsus; (2) Tumevälja kujutis (DFI) on tehnika, mis võimaldab ainult osa suure nurga hajutatud kiirest või kristalli teatud difraktsioonikiirest läbi objektiivi ava, blokeerides samal ajal edastatava kiire. See moodustab tumedal taustal ereda graafilise pildi. See tumevälja kujutise meetod võib parandada kujutiste kontrastsust ja on oluline pildistamistehnika.
Tumevälja kujutiste saamiseks Leica fluorestsentsmikroskoopidega on ligikaudu neli meetodit: (1) vertikaalse valgustuse säilitamine piki optilist telge, liigutades samal ajal objektiivi ava; (2) Kaldvalgustuse kasutamist optilise telje suunas hajutatud kiirte püüdmiseks nimetatakse keskse pimeda välja kujutiseks (CDFI); (3) objektiivi ava, millel on valgusvihu keskne pidur ja ümmargune läbipaistev ala; (4) Kasutage valguse tuvastamiseks ümmargust läbipaistvat kondensaatorläätse ja objektiivi jaoks keskmist ringikujulist ava. Siinne meetod * on kõige lihtsam, kuid see kasutab elektroonilist pildistamist varruka distaalses piirkonnas, seega on aberratsioon suur ja pildikvaliteet pole eriti hea. Teine meetod võib ülaltoodud puudusi vältida, kuid Leica fluorestsentsmikroskoobi objektiivi ava võtab vastu vaid väikese osa hajutatud difraktsiooniga elektronidest, mille tulemuseks on väiksem efektiivsus. Ava külg on sageli allutatud suurele hulgale elektronpommitamisele, mis võib kergesti põhjustada asümmeetrilist saastumist ja mõjutada pildikvaliteeti. Rõngakujulist objektiivi on selles aspektis täiustatud, kuid miinuseks on see, et seda on raske valmistada ja täielikku telgsümmeetriat on raske saavutada. Arvestades valgustussüsteemi suhteliselt leebemaid nõudeid, võib kasutada viimast lahendust, mis hõlmab rõngakujulise ava lisamist kondensaatorisse, et anda näidisele õõneskiire valgustus. Selle seadme mõju. Selle pildi eraldusvõime võib olla lähedane ereda väljaga kujutiste omale, samas kui kontrast on oluliselt paranenud.
