Kuidas valida õige fluorestsentsmikroskoop
Fluorestsentsmikroskoop on standardne mikroskoopiline pildistamisseade laborite ja patoloogiaosakondade jaoks. See kasutab vaatlemiseks ja pildistamiseks fluorestsentsomadusi. Seda kasutatakse laialdaselt rakubioloogias, neurobioloogias, botaanikas, mikrobioloogias, patoloogias, geneetikas ja muudes valdkondades. Fluorestsentskujutise eelisteks on kõrge tundlikkus ja kõrge spetsiifilisus ning see sobib väga hästi spetsiifiliste valkude ja organellide jaotumise jälgimiseks kudedes ja rakkudes, kolokalisatsiooni ja interaktsiooni uurimiseks, elu dünaamiliste protsesside (nt ioonide kontsentratsiooni muutuste) jälgimiseks. , jne.
Mikroskoobi valik
Fluorestsentsmikroskoobid jagunevad peamiselt kolme kategooriasse: püstised fluorestsentsmikroskoobid (sobivad lõikamiseks), pöördfluorestsentsmikroskoobid (sobivad elusrakkudele, võttes arvesse lõikumist), stereoskoopilised fluorestsentsmikroskoobid (sobivad suurematele proovidele, nagu taimed, sebrakala (täiskasvanud/). embrüo), medaka, hiire/roti organid jne).
Fluorestsentsfiltri kuubikute valik
Lisaks fluorestsentssondide ergastuse ja emissiooni lainepikkuste arvestamisele tuleb filtriplokkide valimisel arvestada ka seda, kas mitmevärvilise märgistusega proovide puhul on mittespetsiifiline ergastus ja ristvärv. Katses proovime valida ergastuse piigile lähima lainepikkuse ja vastuvõtuvahemik peab sisaldama emissioonipiiki. Näiteks Alexa Fluor 488 ergastuspiik on 500 nm ja 480/40 ergastusfiltri saab valida fluorestsentsmikroskoobis. Fluorestsentsmikroskoobides tavaliselt kasutatavad fluorestsentsfiltri kuubikud võib jagada kahte tüüpi: long pass (lühendatult LP) ja ribapääs (lühendatult BP), mis tuleb samuti vastavalt vajadustele valida.
Luminofoorvalgusallika valik
Praegu levinud luminofoorvalgusallikate hulka kuuluvad elavhõbedalambid, metallhalogeniidlambid ja LED-valgusallikad, mis on viimastel aastatel kiiresti arenenud. Luminofoorvalgusallika spekter on pidev ja katkendlik ning energia on erinevates ribades erinev. Tänu suhteliselt kitsale spektriribale, stabiilsemale energiaväljundile, pikale elueale, ohutusele ja keskkonnakaitsele ning paljudele muudele eelistele on LED-valgusallikast järk-järgult saamas fluorestsentsmikroskoobi peamine valgusallikas.
konfokaalne mikroskoop
Traditsioonilises fluorestsentsmikroskoobi vaatluses on fluorestseeruvate markerainete ja autofluorestsentsstruktuuride kattumise tõttu need omavahel tihedalt ühendatud, samas kui traditsiooniline epifluorestsentsmikroskoobi objektiiv ei kogu valgust mitte ainult fookustasandilt, vaid kogub hajutatud valgust ka ülevalt ja allapoole. fookustasand, mille tulemuseks on oluliselt vähenenud pildi eraldusvõime ja kontrastsus.
Konfokaalne pildistamine lahendab selle probleemi, tuvastades ainult fookustasandilt peegelduva valguse osa. Valgusallikas läbib nööpaugu, moodustades fookustasandil väikese ja peene valgustäpi. Fokaaltasandist kiirgava valguse kogub objektiiv. Suurem osa objektiiviläätse fookustasandist kõrgemal või allpool asuvast punktist kiirgavast fluorestsentsist ei saa koonduda väikesesse auku. Ainult fookustasandil asuv fluorestsents ja väike osa fookusest väljas olevast fluorestsentsist võivad läbida nööpnõela auku, samas kui fookustasandist väljapoole jäävad valguskiired koonduvad nööpnõelaplaadi esi- või tagaossa ja on blokeeritud läbi detektori sisenemise. nõelaauk. Tuvastatud kujutis on fookustasandi pilt, seega paraneb lõplik pildikvaliteet oluliselt.
Laserskaneeriva konfokaalse mikroskoobi eeliste ja funktsioonide praktilisuse tõttu on konfokaalne mikroskoop ülitäpse rakubioloogia, botaanika ja rakuuuringute valdkonnas asendamatu eksperimentaalne abiline. Samal ajal on tulevases teadusuuringute keskuses kõige elementaarsem ja põhiline teadusuuringute tööriist.
