Kuidas valida sobivat fluorestsentsmikroskoopi
Fluorestsentsmikroskoop on standardne mikroskoopiline pildistamisseade laborites ja patoloogiaosakondades, mis kasutab vaatluseks ja pildistamiseks fluorestsentsnäitajaid. Seda kasutatakse laialdaselt erinevates valdkondades, nagu rakubioloogia, neurobioloogia, botaanika, mikrobioloogia, patoloogia, geneetika jne. Fluorestsentskujutise eelisteks on kõrge tundlikkus ja spetsiifilisus, mistõttu on see väga sobiv spetsiifiliste valkude, organellide jne leviku jälgimiseks. kudedes ja rakkudes, uurides koos lokaliseerimist ja interaktsioone, jälgides elu dünaamilisi protsesse, nagu ioonide kontsentratsiooni muutused jne.
Mikroskoopide valik
Fluorestsentsmikroskoobid jagunevad peamiselt kolme kategooriasse: püstised fluorestsentsmikroskoobid (sobivad viilutamiseks), pöördfluorestsentsmikroskoobid (sobivad elusrakkude jaoks ja ka viilutamiseks) ja stereofluorestsentsmikroskoobid (sobivad suurematele proovidele, nagu taimed, sebrakala (täiskasvanud/). embrüonaalsed), medaka, hiire/roti elundid jne).
Fluorestsentsfiltriplokkide valik
Filtriplokkide valikul ei tohiks arvestada mitte ainult fluorestsentssondide ergastuse ja emissiooni lainepikkusi, vaid ka seda, kas on olemas mittespetsiifiline ergastus ja kas mitmevärvilise märgistusega proovide puhul on värvide läbirääkimine. Eksperimendis valime ergastamiseks võimalikult ergastavale piigile lähima lainepikkuse ja vastuvõtuvahemik peaks sisaldama tippemissiooni. Alexa Fluor 488 ergastuspiik on 500 nm ja 480/40 ergastusfiltri saab valida fluorestsentsmikroskoobis. Fluorestsentsmikroskoopias tavapäraselt kasutatavad fluorestsentsfiltriplokid võib jagada kahte tüüpi: long pass (LP) ja ribapääs (BP), mis tuleb samuti vastavalt vajadustele valida.
Konfokaalne mikroskoop
Traditsioonilistes fluorestsentsmikroskoopilistes vaatlustes on fluorestsentsmärgistatud ainete ja spontaansete fluorestsentsstruktuuride kattumise tõttu need omavahel tihedalt seotud. Kuid traditsioonilised langeva fluorestsentsmikroskoopia objektiivid mitte ainult ei kogu valgust fookustasandilt, vaid hajutavad valgust ka fookustasandil üles ja alla, mille tulemuseks on pildi eraldusvõime ja kontrastsuse märkimisväärne vähenemine.
Konfokaalne kujutis tuvastab ainult iseteravustavalt tasapinnalt peegelduva valguse, lahendades sellega ülaltoodud probleemi. Valgusallikas moodustab läbi nööpaugu fookustasandil väikese ja peene täpi ning fookustasandilt kiirgav valgus kogutakse läbi objektiiviläätse. Suurem osa fluorestsentsist, mis kiirgub objektiivi fookustasandist kõrgemal või allpool asuvatest punktidest, ei saa koonduda nööpaugu külge. Ainult fookustasandil asuv fluorestsents ja väike osa defokuseeritud fluorestsentsist võivad läbida nööpnõelaaugu, samas kui fookustasandist väljapoole jääv valguskiir koondub tihvtiaugu plaadi ette või taha ja on blokeeritud detektorisse sisenemast tihvtiaugu kaudu. Tuvastatud pilt pärineb fookustasandist, seega on lõplik pildikvaliteet oluliselt paranenud.
Tänu laserskaneeriva konfokaalse mikroskoopia erinevatele eelistele ja praktilisusele on see praegu asendamatu eksperimentaalne assistent ülitäpse rakubioloogia, botaanika ja rakuuuringute valdkondades. Samas on see tulevastes teadusuuringute keskustes kõige elementaarsem ja põhilisem uurimisvahend.
