Kuidas valida pöördmikroskoobi ja fluorestsentsmikroskoobi vahel?
Mikroskoop on oluline vahend rakukultuuris ja sellega seotud tuletiskatsetes. Praegu on turul erinevat tüüpi mikroskoope ning vajadustele vastava ja sobiva mikroskoobi valimine on väljakutse. Allpool tutvustame pöördmikroskoopide ja fluorestsentsmikroskoopide põhimõtteid, mille vahel igaüks saab valida.
Pöördmikroskoop, nagu tavaline mikroskoop, koosneb peamiselt kolmest osast: mehaaniline osa, valgustusosa ja optiline osa. Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel püstisel mikroskoobil, välja arvatud see, et objektiivilääts ja valgustussüsteem on vastupidised, kusjuures esimene on lava all ja teine lava kohal. See struktuur suurendab oluliselt valgustusprožektorite süsteemi ja lava vahelist efektiivset kaugust, muutes paksemate vaatlusvahendite, nagu kultiveerimisnõud ja rakukultuuripudelid, paigutamise lihtsamaks (muidugi võib kasutada ka klaasplaate), samas kui töökaugus objektiiv ja materjal ei pea olema väga suur. Pöördmikroskoopi kasutavad meditsiini- ja tervishoiuasutused, ülikoolid ja uurimisinstituudid mikroorganismide, rakkude, bakterite, koekultuuride, suspensioonide, setete jms vaatlemiseks. See võimaldab pidevalt jälgida rakkude ja bakterite vohamise ja jagunemise protsessi söötmes ning suudab selle protsessi mis tahes vormis jäädvustada. Laialdaselt kasutatav sellistes valdkondades nagu tsütoloogia, parasitoloogia, onkoloogia, immunoloogia, geenitehnoloogia, tööstuslik mikrobioloogia ja botaanika.
Fluorestsentsmikroskoopiat kasutatakse ainete imendumise, transpordi, jaotumise ja lokaliseerumise uurimiseks rakkudes. Testitava objekti puhul on fluorestsentsi tekitamiseks kaks võimalust: spontaanne fluorestsents, mida kiirgab otse ultraviolettkiirgus; Sekundaarne fluorestsents tekib siis, kui vaadeldavat objekti töödeldakse fluorestseeruvate värvainetega ja eksponeeritakse ultraviolettvalgusega enne fluorestsentsi kiirgamist. Mõned rakkudes olevad ained, näiteks klorofüll, tekitavad pärast ultraviolettkiirgusega kokkupuudet spontaanse fluorestsentsi; Mõned ained ise ei pruugi fluorestsentsi kiirata, kuid fluorestseeruvate värvainete või fluorestseeruvate antikehadega värvimisel võivad nad ultraviolettkiirguse toimel kiirata ka sekundaarset fluorestsentsi. Fluorestsentsmikroskoop kasutab kõrge valgustõhususega punktvalgusallikat, et kiirata teatud lainepikkusega valgust (UV 365 nm või UV sinine 420 nm) läbi värvifiltrisüsteemi ergastusvalgusena, mis ergastab proovis olevaid fluorestseeruvaid aineid, et kiirgaks erinevat värvi fluorestsentsi. Pärast seda jälgitakse seda objektiiviläätse ja okulaari suurendusega. Sel viisil on see isegi nõrga fluorestsentsi korral kergesti äratuntav ja tugeva kontrastse tausta korral väga tundlik. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri, funktsiooni ja keemilise koostise uurimiseks.
Fluorestsentsmikroskoopia võib jagada kahte tüüpi: ülekandetüüp ja langev tüüp. Esimene neist on primitiivsem, teine aga arenenum. Kahe tüüpi fluorestsentsmikroskoobi põhikonstruktsioon on sarnane, peamine erinevus seisneb selles, et edastatav ergastusvalgus läbib proovi, tekitades fluorestsentsi tervikuna. Seejärel siseneb fluorestsents objektiivi ja mida suurem on suurendus, seda nõrgem on fluorestsents; Langev ergastusvalgus projitseerub proovi pinnale, tekitades fluorestsentsi, mis siseneb objektiiviläätsesse. Mida suurem on suurendus, seda tugevam on fluorestsents, mistõttu sobib see suure võimsusega vaatlemiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhikomponentide hulka kuuluvad elavhõbedalambi valgusallikas, ergastusfiltri plaat, spektrofotomeeter (tilgatüüp), summutusfiltri plaat ja tumeda välja kondensaator (edastustüüp). Lisaks on elavhõbedalampide tugeva kuumenemise tõttu enamik neist varustatud ka soojust neelavate filtritega. Mõnel fluorestsentsmikroskoobil on ka faasikontrastsuse objektiiv ja ümmargune ava, mis võimaldab jälgida faasikontrastsust. Mõned fluorestsentsmikroskoobid kasutavad ümberpööratud struktuuri, mis on ka pöördmikroskoop jne.
Lisaks saab eelmainitud mikroskoobid kokku panna digitaalmikroskoobideks, paigaldades CCD, mis teisendab mikroskoobiga nähtavad füüsilised kujutised digitaalseks analoogkujutiseks ja pildistab need arvutis. Selle tulemusena saame oma mikrovaldkonna uurimistööd suunata traditsiooniliselt binokulaarselt vaatlemiselt kuvarite abil reprodutseerimisele, parandades seeläbi töö efektiivsust.
