Kuidas valida pöördmikroskoobi ja fluorestsentsmikroskoobi vahel?
Rakukultuuris ja sellega seotud tuletiskatsetes on mikroskoop väga oluline instrument. Praegu on turul erinevat tüüpi mikroskoope. Vajadustele vastava ja rakendatava mikroskoobi valimine on väljakutse. Järgnevalt tutvustame pöördmikroskoopide ja fluorestsentsmikroskoopide põhimõtteid, et saaksite hõlpsalt valida.
Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel mikroskoobil, koosneb peamiselt kolmest osast: mehaaniline osa, valgustusosa ja optiline osa. Pöördmikroskoobi koostis on sama, mis tavalisel püstisel mikroskoobil, välja arvatud see, et objektiiv ja valgustussüsteem on vastupidised, esimene asub lava all ja teine lava kohal. Selline struktuur võib oluliselt laiendada efektiivset kaugust valgustuse kontsentreerimissüsteemi ja lava vahel, mis on mugav paigutada paksemaid vaadeldavaid objekte, nagu kultiveerimisnõud ja rakukultuuri pudelid (saadaval on loomulikult ka klaasklaasid jms) , ja samal ajal objektiivi ja materjali vaheline kaugus Nendevaheline töökaugus ei pea olema väga suur. Pöördmikroskoope kasutatakse mikroorganismide, rakkude, bakterite, koekultuuride, suspensioonide, setete jms vaatlemiseks meditsiini- ja tervishoiuüksustes, kõrgkoolides ja uurimisinstituutides. See suudab pidevalt jälgida rakkude, bakterite jne paljunemis- ja jagunemisprotsessi kultiveerimissöötmes ning pildistada protsessi mis tahes kujul. Seda kasutatakse laialdaselt tsütoloogias, parasitoloogias, onkoloogias, immunoloogias, geenitehnoloogias, tööstuslikus mikrobioloogias, botaanikas ja muudes valdkondades.
Fluorestsentsmikroskoopiat kasutatakse ainete neeldumise ja transpordi uurimiseks rakkudes, keemiliste ainete jaotumise ja lokaliseerimise uurimiseks jne. Vaadeldava objekti puhul on fluorestsentsi tekitamiseks kaks võimalust: autofluorestsents, mis kiirgab fluorestsentsi vahetult pärast ultraviolettkiirgusega kiiritamist. valgus; Mõned rakkudes olevad ained, näiteks klorofüll, tekitavad pärast ultraviolettkiirtega kiiritamist autofluorestsentsi; kuigi mõned ained ise ei saa fluorestseeruda, võivad nad pärast ultraviolettkiirgusega kiiritamist fluorestseeruvate värvide või fluorestseeruvate antikehadega värvimise järel kiirata ka sekundaarset fluorestsentsi. Fluorestsentsmikroskoobis kasutatakse kõrge valgustõhususega punktvalgusallikat, mis kiirgab ergastusvalgusena läbi filtrisüsteemi teatud lainepikkusega valgust (ultraviolettvalgus 365 nm või lilla sinine valgus 420 nm) ning pärast proovis olevate fluorestseeruvate ainete ergastamist eri fluorestsentsi kiirgamiseks. värve, siis Vaatlemine toimub objektiiviläätse ja okulaari suurenduse kaudu. Sel viisil on tugeva kontrastsusega tausta all, isegi kui fluorestsents on väga nõrk, lihtne tuvastada ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsioonide ning keemilise koostise uurimiseks.
Fluorestsentsmikroskoobid jagunevad ülekandetüüpideks ja epi-ejection tüüpideks, esimene on primitiivsem ja teine arenenum. Kahe tüüpi fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur on sarnane, peamine erinevus seisneb selles: ülekande tüüpi ergastusvalgus läbib proovi ja kogu proov tekitab fluorestsentsi, mis seejärel siseneb objektiivi. Mida suurem on suurendus, seda nõrgem on fluorestsents; epi-emissiooni tüüpi ergastusvalgus projitseeritakse proovi pinnale, proovi pind tekitab fluorestsentsi ja fluorestsents siseneb uuesti objektiivi. Mida suurem on suurendus, seda tugevam on fluorestsents, mis sobib suure suurendusega vaatlemiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhikomponentide hulka kuuluvad elavhõbedalambi valgusallikas, ergastusfiltri plaat, dikroonne peegel (episooditüüp), pressitud filterplaat ja tumevälja kondensaator (edastustüüp) jne. Lisaks on tänu elavhõbedalampide tugev kuumenemine, enamik neist on varustatud ka soojust neelavate filtritega. Mõnel fluorestsentsmikroskoobil on ka faasikontrastsuse objektiivid ja rõngakujulised diafragmad, seega on faasikontrastsuse vaatlused võimalikud. On ka fluorestsentsmikroskoope, millel on ümberpööratud struktuur, teine pöördmikroskoop jne.
Lisaks saab ülalmainitud mikroskoobid kokku panna digitaalmikroskoobiks, paigaldades CCD, mis muudab mikroskoobiga nähtava füüsilise pildi digitaal-analoog teisendamise teel arvutis olevaks pildiks. Seetõttu saame muuta mikroskoopilise välja uurimist traditsioonilisest tavalisest binokulaarsest vaatlusest ekraanil reprodutseerimisele, parandades seeläbi töö efektiivsust.
