Kuidas fluorestsentsmikroskoopia erineb laserkonfokaalsest mikroskoopiast
Fluorestsentsmikroskoop
1, fluorestsentsmikroskoobi eesmärk on kasutada valgusallikana ultraviolettvalgust, mida kasutatakse uuritava objekti kiiritamiseks, nii et see kiirgab fluorestsentsi, ning seejärel jälgida objekti kuju ja asukohta mikroskoobi all. Fluorestsentsmikroskoopi kasutatakse keemiliste ainete imendumise, transpordi, jaotumise ja lokaliseerimise uurimiseks rakkudes. Mõned rakus olevad ained, näiteks klorofüll, võivad pärast ultraviolettkiirgusega kiiritamist fluorestseeruda; on aineid, mis iseenesest fluorestseeruda ei suuda, kuid fluorestseeruvate värvide või fluorestseeruvate antikehadega värvituna võivad nad fluorestseeruda ka pärast ultraviolettkiirgusega kiiritamist ning fluorestsentsmikroskoopia on üks vahend seda tüüpi ainete kvalitatiivseks ja kvantitatiivseks uurimiseks.
2, fluorestsentsmikroskoobi põhimõte:
(A) valgusallikas: valgusallikas kiirgab erineva lainepikkusega valgust (ultravioletsest infrapunani).
(B) ergastusfiltri allikas: läbi proovi võib tekitada teatud valguse lainepikkusega fluorestsentsi, blokeerides samal ajal kasutu valguse ergastuse.
(C) Fluorestseeruv proov: üldiselt värvitud fluorokroomiga.
(D) Blokeerivad filtrid: blokeerivad ergastusvalguse, mida proov ei neela, et selektiivselt fluorestsentsi edastada, ja ka mõned fluorestsentsi lainepikkused edastatakse selektiivselt. Mikroskoop, mis kasutab kiiritatud objekti fluorestseerimiseks valgusallikana ultraviolettvalgust. Elektronmikroskoobi koostasid esmakordselt 1931. aastal Saksamaal Berliinis Knorr ja Haroska. See mikroskoop kasutab valguskiire asemel kiiret elektronkiirt. Kuna elektronide voo lainepikkus on palju lühem kui valguslainel, võib elektronmikroskoobi suurendus olla kuni 800,000 korda, minimaalse eraldusvõimega 0,2 nanomeetrit . 1963. aastal hakati kasutama skaneerivat elektronmikroskoobi, mida saab näha objekti pisikese struktuuri pinnal.
3, rakendusala: kasutatakse väikeste objektide kujutise suurendamiseks. Tavaliselt kasutatakse bioloogias, meditsiinis, mikroskoopilistes osakestes ja muudes vaatlustes.
Konfokaalne mikroskoop
1, konfokaalne mikroskoop teel peegeldunud valguses pluss poolpeegeldav poollääts, on läbinud peegeldunud valguse läätse teistes suundades volditud, fookuses nööpauguga deflektoril, auk asub fookus, deflektori taga on fotokordisti toru. Võib ette kujutada, et peegeldunud valgus enne ja pärast detektori valguse fookuspunkti läbi selle konfokaalse süsteemi komplekti ei suuda keskenduda väikesele augule, vaid blokeeritakse deflektoriga. Seega mõõdab fotomeeter fookuspunktis peegeldunud valguse intensiivsust.
2, põhimõte: traditsiooniline optiline mikroskoop kasutab väljavalgusallikat, proovi iga punkti kujutist häirib valguse difraktsioon või hajumine naaberpunktidest; laserskaneeriv konfokaalne mikroskoop kasutab laserkiirt läbi valgustava tihvtiaugu, et moodustada proovi punktvalgusallikas proovi iga punkti skaneerimise fookustasandil, proovi kiiritatakse nööpnõela ava tuvastamisel pildistamisel. , mõõdetakse fotomeetriga valguse intensiivsust, tuvastades fotokordisti toru (PMT) või külma elektriühendusseadme (cCCD) järel punkt-punktilt või punkt-punktilt või punkt-punktilt nööpnõela intensiivsust. cCCD) võtab vastu punkt-punkti või rida-realt ja moodustab arvutimonitori ekraanil kiiresti fluorestseeruva kujutise. Valgustusava ja tuvastusnõelaauk objektiivi fookustasandi suhtes on konjugeeritud, fookustasandil asuv punkt keskendub samal ajal valgustuse tihvtiaugule ja emissiooninõelaaugule, fookustasandist väljapoole jääv punkt ei asu tuvastusnõelaaugus pildistamine, nii et konfokaalne kujutis on optilise ristlõike näidis, mis ületab tavaliste mikroskoopide häguste kujutiste puudused.
3, rakendusvaldkonnad: meditsiin, looma- ja taimeuuringud, biokeemia, bakterioloogia, rakubioloogia, koeemrüoloogia, toiduteadus, geneetika, farmakoloogia, füsioloogia, optika, patoloogia, botaanika, neuroteadus, merebioloogia, materjaliteadus, elektroonikateadus, mehaanika, naftageoloogia, mineraloogia.
