Fluorestsentsmikroskoopia tehnilised parameetrid Fluorestsentsmikroskoopia tehnikad ja meetodid
Fluorestsentsmikroskoobi tehnilised parameetrid 1. Lainurk okulaar 2. Akromaatiline objektiiv 3. Nelja auguga objektiivi muundur 4. Epi-fluorestsentsseade Sinine (B) Roheline (G) ergastussüsteem 100W elavhõbedalamp 5. Koaksiaalne jäme- ja peenfookuse reguleerimise mehhanism: reguleerimine Fookuse ulatus: 15 mm Mikroliikumise ruudustiku väärtus: 0,002 mm 6. Kahekihiline mehaaniline laud Pikisuunaline liikumisulatus: 70 mm Külgsuunalise liikumise ulatus: 50 mm
Fluorestsentsmikroskoobi tehnilised parameetrid
1. Lainurk-okulaar
2. Akromaatiline objektiiv
3. Nelja avaga ninaotsik
4. Epi-fluorestsentsseade sinine (B) roheline (G) ergutussüsteem 100W elavhõbedalamp
5. Koaksiaalne jäme- ja peenfookuse reguleerimise mehhanism: fookusvahemik 15 mm peenliikumise ruudustiku väärtus 0,002 mm
6. Kahekihiline mehaaniline töölaud
Vertikaalne liikumisulatus: 70 mm Külgsuunaline liikumisulatus: 50 mm
Fluorestsentsmikroskoopia oskused ja meetodid
(1) Klaasist liug
Klaasklaasi paksus peaks olema vahemikus 0,8 kuni 1,2 mm. Liiga paks alusklaas neelab ühelt poolt rohkem valgust ja teisest küljest ei saa ergastavat valgust katsekehale kontsentreerida. Slaidid peavad olema siledad, ühtlase paksusega ja ilma ilmse autofluorestsentsita. Mõnikord kasutatakse kvartsklaasist slaide.
(2) Katteklaas
Katteklaasi paksus on umbes 0,17 mm, sile. Ergastusvalguse tugevdamiseks võib kasutada ka interferentsi katteklaasi, mis on spetsiaalne katteklaas, mis on kaetud mitme ainekihiga (nt magneesiumfluoriid), millel on erineva lainepikkusega valgusele erinev interferents, mis võib fluorestsents läheb sujuvalt. Põnev valgus lastakse läbi ja peegeldub ning see peegeldunud ergastusvalgus erutab proovi.
(3) Näidis
Koeviilud või muud proovid ei tohiks olla liiga paksud. Kui see on liiga paks, kulub suurem osa ergastavast valgusest proovi alumises osas, samas kui objektiivi otse vaadeldav ülemine osa ei ergastu täielikult. Lisaks mõjutavad otsust rakkude kattumine või lisandikate.
(4) Kinnitusvahend
Tavaliselt kasutatakse kinnitusainena glütseriini, millel ei tohi olla autofluorestsentsi, see ei tohi olla värvitu ja läbipaistev ning fluorestsentsi heledus on heledam pH väärtusel 8.5-9.5 ja seda ei ole lihtne kiiresti tuhmuda. Seetõttu kasutatakse kinnitusainena tavaliselt võrdset segu glütseroolist ja 0,5 mol/l karbonaadi puhverlahusest, mille pH on 9.0 kuni 9,5.
(5) peegliõli
Üldiselt tuleb proovide vaatlemisel tumevälja fluorestsentsmikroskoobi ja õliimmersioonläätsedega kasutada immersioonõli. Parim on kasutada spetsiaalset mittefluorestseeruvat immersiooniõli. Selle asemel võib kasutada ka ülaltoodud glütseriini ja kasutada ka vedelat parafiini, kuid murdumisnäitaja on madal, mis pildikvaliteeti veidi mõjutab. Mõjutamine.
Fluorestsentsmikroskoobi põhimõte ja struktuursed omadused
Fluorestsentsmikroskoopia kasutab suure valgusefektiivsusega punkti, et kiirata läbi filtrisüsteemi teatud lainepikkusega valgust (näiteks ultraviolettvalgust 3650 tolli või lillatsinist valgust 4200 tolli) ergastava valgusena, et ergutada proovis olevaid fluorestseeruvaid aineid, et kiirata fluorestsentsi. erinevad värvid Pärast seda jälgige objektiivi ja okulaari suurendusega. Sel viisil on tugeva kontrastsusega tausta all, isegi kui fluorestsents on väga nõrk, lihtne tuvastada ja see on kõrge tundlikkusega. Seda kasutatakse peamiselt raku struktuuri ja funktsioonide ning keemilise koostise uurimiseks. Fluorestsentsmikroskoobi põhistruktuur koosneb tavalisest optilisest mikroskoobist ja mõnedest tarvikutest (nagu fluorestsentsvalgusallikas, ergastusfilter, kahevärviline kiire jaotur ja blokeeriv filter jne). Luminofoorvalgusallikas – kasutatakse tavaliselt ülikõrgsurve elavhõbedalampi (50-200W), mis võib kiirata erineva lainepikkusega valgust, kuid igal fluorestseeruval ainel on ergastuslainepikkus, mis tekitab kõige tugevama fluorestsentsi, seega ergastusfilter ( Üldiselt on olemas ultraviolett-, lilla-, sinine ja roheline ergastusfiltrid), mis lasevad läbi ainult teatud lainepikkusega ergastusvalguse ja kiiritavad proovi, neelates samal ajal muud valgust. Pärast iga aine kiiritamist ergastusvalgusega kiirgab see väga lühikese aja jooksul nähtavat fluorestsentsi, mille lainepikkus on pikem kui kiirguse lainepikkus. Fluorestsents on spetsiifiline ja üldiselt nõrgem kui ergastusvalgus. Spetsiifilise fluorestsentsi jälgimiseks tuleb objektiivi taha lisada blokeering (või summutus) ja seda kasutada koos sellega.
Erinevus fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise mikroskoobi vahel
1. Valgustusmeetod on tavaliselt episkoopiline, st valgusallikas projitseeritakse näidisele läbi objektiivi;
2. Valgusallikaks on ultraviolettvalgus, lainepikkus on lühem ja eraldusvõime kõrgem kui tavalistel mikroskoopidel;
3. Spetsiaalseid filtreid on kaks, valgusallika ees olevat filtrit kasutatakse nähtava valguse väljastamiseks ning okulaari ja objektiiviläätse vahelist ultraviolettkiirte filtreerimiseks, et kaitsta inimsilma.
Fluorestsentsmikroskoop on ka omamoodi optiline mikroskoop, peamine erinevus seisneb selles, et nende kahe ergastuslainepikkus on erinev. See määrab fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi erinevuse struktuuri ja kasutuse osas.
Fluorestsentsmikroskoopia on immunofluorestsentstsütokeemia oluline tööriist. See koosneb põhikomponentidest, nagu valgusallikas, filtriplaadi süsteem ja optiline süsteem. See on teatud valguse lainepikkuse kasutamine proovi ergutamiseks fluorestsentsi kiirgamiseks ja proovi fluorestsentskujutise jälgimine objektiivi ja okulaari süsteemi võimendamise teel.
