Fluorestsentsmikroskoopia oskused ja meetodid
Fluorestsentsmikroskoobi tehnilised parameetrid 1. Lainurk-okulaar 2. Akromaatiline objektiiv 3. Nelja auguga objektiivi muundur 4. Epi-fluorestsentsseade Sinine (B) Roheline (G) ergastussüsteem 100W elavhõbedalamp 5. Koaksiaalne jäme- ja peenfookuse reguleerimise mehhanism: Reguleerige Fookuse vahemik: 15 mm Mikroliikumise ruudustiku väärtus: 0,002 mm 6. Kahekihiline mehaaniline laud Pikisuunaline liikumisulatus: 70 mm Külgsuunalise liikumise vahemik: 50 mm
Fluorestsentsmikroskoobi tehnilised parameetrid
1. Lainurk-okulaar
2. Akromaatiline objektiiv
3. Nelja avaga ninaotsik
4. Epi-fluorestsentsseade sinine (B) roheline (G) ergutussüsteem 100W elavhõbedalamp
5. Koaksiaalne jäme- ja peenfookuse reguleerimise mehhanism: fookusvahemik 15 mm peenliikumise ruudustiku väärtus 0,002 mm
6. Kahekihiline mehaaniline töölaud
Vertikaalne liikumisulatus: 70 mm Külgsuunaline liikumisulatus: 50 mm
Fluorestsentsmikroskoopia oskused ja meetodid
(1) Klaasist liug
Klaasklaasi paksus peaks olema vahemikus 0,8 kuni 1,2 mm. Liiga paks alusklaas neelab ühelt poolt rohkem valgust ja teisest küljest ei saa ergastavat valgust katsekehale kontsentreerida. Slaidid peavad olema siledad, ühtlase paksusega ja ilma ilmse autofluorestsentsita. Mõnikord kasutatakse kvartsklaasist slaide.
(2) Katteklaas
Katteklaasi paksus on umbes 0,17 mm, sile. Ergastusvalguse tugevdamiseks võib kasutada ka interferentsi katteklaasi, mis on spetsiaalne katteklaas, mis on kaetud mitme ainekihiga (nt magneesiumfluoriid), millel on erineva lainepikkusega valgusele erinev interferents, mis võib fluorestsents läheb sujuvalt. Põnev valgus lastakse läbi ja peegeldub ning see peegeldunud ergastusvalgus erutab proovi.
(3) Näidis
Koeviilud või muud proovid ei tohiks olla liiga paksud. Kui see on liiga paks, kulub suurem osa ergastavast valgusest proovi alumises osas, samas kui objektiivi otse vaadeldav ülemine osa ei ergastu täielikult. Lisaks mõjutavad otsust rakkude kattumine või lisandikate.
(4) Kinnitusvahend
Tavaliselt kasutatakse kinnitusainena glütseriini, millel ei tohi olla autofluorestsentsi, see ei tohi olla värvitu ja läbipaistev ning fluorestsentsi heledus on heledam pH väärtusel 8.5-9.5 ja seda ei ole lihtne kiiresti tuhmuda. Seetõttu kasutatakse kinnitusainena tavaliselt võrdset segu glütseroolist ja 0,5 mol/l karbonaadi puhverlahusest, mille pH on 9.0 kuni 9,5.
(5) peegliõli
Üldiselt tuleb proovide vaatlemisel tumevälja fluorestsentsmikroskoobi ja õliimmersioonläätsedega kasutada immersioonõli. Parim on kasutada spetsiaalset mittefluorestseeruvat immersiooniõli. Selle asemel võib kasutada ka ülaltoodud glütseriini ja kasutada ka vedelat parafiini, kuid murdumisnäitaja on madal, mis pildikvaliteeti veidi mõjutab. Mõjutamine.
