Konfokaalse lasermikroskoopia omadused ja rakendused
Laser-skaneeriv konfokaalne mikroskoop (LSCM) on teatud tüüpi mikroskoop, mis on loodud konjugaatfookuse tehnoloogial, st nii, et laservalgusallikas, testitav proov ja detektor on üksteisega konjugeeritud asendis.
Fundamentaalne
Üldmikroskoopides langeb objektiiviläätse fookustasand detektoriga kokku nii, et vaadeldav pilditasand on isoleeritud külgnevast telgtasapinnast, samas kui konfokaalsetes mikroskoopides valgustatakse proov difraktsioonipiiranguga valguspunkti abil. See isolatsiooniefekt saavutatakse, kasutades täppkonjugaadi fookuspunktis valguse kogumisrajal tihvti, et filtreerida hajutatud valgust eraldusvõime parandamiseks.
Pildistamise funktsioonid
Ainult konjugeeritud proovikihist tagasi peegelduv valgus võib läbida kogumisvalguse tee väikese augu ja ülejäänud ebaolulised proovikihi peegeldused blokeeritakse väikese auguga. See võib eraldusvõimet oluliselt suurendada. Allpool on näidatud sama paksu proovi mitmemõõtmelise fluorestsentsmikroskoopia ja konfokaalse mikroskoopia kõrvuti võrdlus. Kui pildiseeria tehakse erinevatel fookustasanditel, saab genereerida seda, mida tavaliselt nimetatakse "z-stackiks" ja see pilt näitab nii konfokaalse mikroskoopia pakutavat eraldusvõime ja kontrasti suurenemist kui ka nende võimete põhjuseid. Virna ülaosas asuva kujutise uurimine koe kohal oleva pilditasapinnaga paljastab fluorestsentskujutises palju hajutatud valgust, samas kui konfokaalne pilt näib olevat must. See polüesterstaapelkiudude vähenemine aksiaalsuunas on otseselt vastutav eraldusvõime erinevuse eest, mida täheldati z-virna keskel asuvas optilises liideses.
Veel üks laserskaneeriva konfokaalse mikroskoopia omadus on see, et see on skaneeriva kujutise tehnoloogia. Traditsiooniline laia väljaga valgustustehnoloogia valgustab kogu näidist, nii et pilti saab otse jäädvustada palja silma või detektoriga, kuid LSCM kasutab skaneerimiseks ja pildistamiseks kiirt või proovist läbib mitu fokuseeritud kiirt ning tulemuseks on pilt. nimetatakse optiliseks sektsiooniks. Järgnevalt on näidatud erinevus traditsioonilise laia väljaga valgustusmeetodi ja laserskaneeriva konfokaalse valgustusmeetodi vahel.
Seetõttu on kaasaegse konfokaalse mikroskoobi praktiline töömeetod näidatud alloleval joonisel. Laseri poolt kiiratav ergastusvalgus läbib dikroonse peegli ja skaneerib proovi x- ja y-suunas läbi vibreerivate peeglite paari. Proovi ergastus (või peegeldus) Valgus siseneb PMT-detektorisse läbi tihvtiaugu ja salvestatakse ning salvestatud skaneerimiskujutis rekonstrueeritakse arvuti poolt, et saada tegelik näidiskujutis.
