Transmissiooni fluorestsentsmikroskoopia ja peegeldusfluorestsentsmikroskoopia erinevused ning eelised ja puudused
1. Transmissiooni fluorestsentsmikroskoop: ergastusvalgusallikas edastatakse fluorestsentsi ergutamiseks läbi proovimaterjali läbi kondensaatori. Tavaliselt kasutatavaid tumeda välja kontsentraatoreid või tavalisi kontsentraatoreid saab kasutada reflektori reguleerimiseks, et teisendada ergutusvalgus ja külgvalgus proovile. See on suhteliselt vanamoodne fluorestsentsmikroskoop. Selle eeliseks on tugev fluorestsents madalal suurendusel, miinuseks aga see, et fluorestsents nõrgeneb suureneva suurendusega. Seetõttu on see parem suuremate proovimaterjalide vaatlemiseks.
2. Langevate kiirtega fluorestsentsmikroskoop: see on uut tüüpi fluorestsentsmikroskoop, mis on välja töötatud kaasajal. Erinevalt eelmisest langeb ergastusvalgus objektiivilt alla proovi pinnale, kasutades fluorestsentsi kogumiseks sama objektiivi kui valgustuskondensaatorit ja objektiivi. Optilisele teele tuleb lisada kahevärviline kiirte eraldaja, mis moodustab fotouraaniga 45 kraadise nurga. Ergastusvalgus peegeldub objektiivil ja koguneb proovile. Proovi tekitatud fluorestsents ning objektiivi ja katteklaasi pinnalt peegelduv ergastusvalgus sisenevad samaaegselt objektiivi ja naasevad kahe värvikiire eraldajasse, eraldades ergastusvalguse ja fluorestsentsi. Seejärel neelab jääkergutusvalguse blokeeriv filter. Kui kasutatakse erinevaid ergastusfiltrite, kahevärviliste kiirte eraldajate ja blokeerivate filtrite kombinatsioone, võivad need rahuldada erinevate fluorestseeruvate reaktsiooniproduktide vajadusi. Selle fluorestsentsmikroskoobi eelised on ühtlane vaatevälja valgustus, selge kujutis ja tugevam fluorestsents suurema suurendusega.
Transmissiooni fluorestsentsmikroskoopia eelised ja puudused
Valgusallikas: kõrgsurve elavhõbedalamp või halogeenlamp.
Kohtvalgusti peegel: tumeda välja prožektori kasutamine ergastuse ja fluorestsentsi eraldamiseks.
Objektiiv: kasutada võib igat tüüpi objektiivi.
Proov: õhukesed isendid sobivad paremini ülekande vaatlemiseks.
Eelised: ① Tumevälja kondensaatori kasutamise tõttu ei pääse ergastav valgus objektiivi, mistõttu on lihtne moodustada tumedat tausta ja saavutada hea kontrast ning vaatlemiseks saab kasutada mis tahes objektiivi. ② Madala suurendusega objektiivi kasutamisel on see heledam kui peegeldav fluorestsentsmikroskoop.
Puudus: Prožektori keskosa ja kõrgus peavad olema õigesti reguleeritud, vastasel juhul ei saa eredat fluorestseeruvat pilti. Tumevälja prožektori fookuskauguse piirangu tõttu ei saa kasutada paksu klaasist slaide. Vaatevälja valgustusala ei tohiks olla liiga suur, vastasel juhul võib fluorestseeruva proovi fluorestsentsvärv tuhmuda. Paksud või läbipaistmatud isendid ei sobi.
Peegelduva fluorestsentsmikroskoopia eelised ja puudused
Valgusallikas: kõrgsurve elavhõbedalamp või halogeenlamp.
Teravustamisobjektiiv: kuna objektiivi objektiiv toimib teravustamisobjektiivina, pole teravustamisläätse vaja.
Objektiivlääts: kasutatav objektiiv peab suutma läbi lasta piisavalt ultraviolettvalgust ega tohi ise tekitada fluorestsentsi ilma arvulise ava piiranguteta.
Proov: Vaadelda võib nii jämedaid kui ka läbipaistmatuid proove.
Eelised: ① Kuna objektiivi objektiiv toimib ka prožektorina, ei vaja see palju reguleerimist. ② Kolari valgustusmeetodit kasutades saab ära kasutada ava ja vaatevälja avade mõju Objektiivi objektiivi numbriline ava ei ole piiratud ning suure eraldusvõimega pilte saab saada ka suure suurendusega. vaadeldakse ja kasutada saab ka pakse katteklaase. Peegeldunud fluorestsentsiga saab kombineerida ka teisi vaatlusmeetodeid, eriti faaside erinevuse meetodit ja ülekandediferentsiaalinterferentsi meetodit. See võib vältida tarbetut fluorestsentsi värvi tuhmumise nähtust.
Puudus: Maapinna suurendusega objektiivi kasutamisel on pilt suhteliselt tume, seega tuleb kasutada suure numbrilise avaga objektiivi. Filtrisüsteem peab tõhusalt eraldama ergastuse luminestsentsi ja fluorestsentsi.
