Erinevus fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi vahel
Fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi erinevus, fluorestsentsmikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi erinevus on erinev, proovi ei jälgita tavalise valgusallika valgustuse kaudu, vaid teatud valguse lainepikkuse (tavaliselt ultraviolett, sinakasvioletne) kasutamine. proovi ergastamine mikroskoobi all fluorestseeruva materjali sees, nii et see kiirgab fluorestseeruvat valgust, nii et fluorestsentsmikroskoobi roll valgusallikas ei ole otsene valgustus, vaid katsekeha omamoodi stimuleerimine sisemise valguse fluorestsentsi Fluorestsentsmikroskoobi allikas ei ole otsene valgustus, vaid energiaallikas proovi sees oleva fluorestseeruva aine stimuleerimiseks. Põhjus, miks me proovi vaadelda saame, ei tulene mitte valgusallika valgustusest, vaid fluorestsentsnähtusest, mida fluorestseeruv aine esitab proovis pärast ergastatud valgusenergia neelamist. On näha, et fluorestsentsmikroskoobi omadused seisnevad peamiselt selles, et selle valgusallikas suudab pakkuda suurel hulgal ergastava valguse spetsiifilist lainepikkuse vahemikku, nii et uuritavas proovis olevad fluorestseeruvad ained suudavad saada vajaliku ergastusvalguse intensiivsuse. Samas peab fluorestsentsmikroskoobis olema vastav filtrisüsteem. Fluorestsentsmikroskoop on **fluorestsentshistokeemia põhitööriist. See koosneb ülikõrgsurve valgusallikast, filtrisüsteemist (sealhulgas ergastus- ja summutusfiltriplaadist), optilisest süsteemist ja fotosüsteemist ning muudest peamistest komponentidest, on teatud valguse lainepikkuse kasutamine, et stimuleerida proovi fluorestsentsi kiirgama.
1. Fluorestsentsi ergastamise viis: vastavalt lainepikkuse vahemikule jaguneb valgus UV-ergastusmeetodiks (kasutades ultraviolettvalgust) ja BV-ergastusmeetodiks (kasutades sinist violetset valgust) kahte tüüpi UV-ergastusmeetodit on ultraviolettvalguse lähedal lühem kui 400 nm. erutus. Selle meetodi puhul ei ole nähtavat ergastusvalgust, seega näitab vaadeldav fluorestsents värvainele omast fluorestsentsi ja proovi spetsiifilist fluorestsentsi on lihtne taustkoe isefluorestsentsist eristada.
2. BV ergastusmeetod: meetodi keskmes on 404 nm, 434 nm ultraviolettkiirgusest ergastamiseks sinisele valgusele. See meetod kasutab proovi kiiritamiseks sinist valgust, seega peab fluorestsentsvaatlussüsteemi väljalülitusfilter kasutama filtrit, mis suudab täielikult blokeerida sinise valguse ja läbida soovitud rohelise ja kollase fluorestsentsi. Fluorestseeruvad pigmendid fluorestseeruvate antikehade meetodile. Kuna ergastusvalguse maksimaalse neeldumise lainepikkus ja fluorestsentsi maksimaalse emissiooni lainepikkus on teineteisele lähedased, peavad BV ergastusmeetodil kasutatavad filtrid olema teravad lõikefiltrid. See meetod kasutab ergastusvalgusena sinist valgust, nii et fluorokroomi neeldumistõhusus on kõrgem ja saab heledama pildi. Puuduseks on see, et alla 500 nm fluorestsentsi pole näha ja üle 500 nm paistab kogu pilt kollane. Fluorestseeruva antikeha meetodi puhul hinnatakse suuremat osa spetsiifilisusest fluorokroomile omase värvi järgi, nii et ülalkirjeldatud BV ergastusmeetodi puudused kipuvad peene spetsiifilisuse arutamisel olema äärmiselt mõjukad.
