Kirjeldage üksikasjalikult konfokaalse mikroskoopia fluorestsentssondide valikuetappe ja meetodeid
Konfokaalsete mikroskoopidega tehtud katsetes saab osa katseindikaatoreid tuvastada proovi enda või eksogeensete ainete autofluorestsentsi abil, kuid enamikul testitavatest ainetest ei ole mõõdetavat fluorestsentsi ja need tuleb märgistada fluorestsentssondidega. Sellel on mõõdetav fluorestsentssignaal. Niisiis, kuidas valida konfokaalseks mikroskoopiaks fluorestseeruvaid sonde?
1. Määrake testitavad näitajad vastavalt katse eesmärgile
Kui tuvastamisindeks on kindlaks määratud, määratakse ka fluorestseeruvate sondide valikuvahemik. On näha, et valiku, millist fluorestsentssondi katses kasutada, määrab katse eesmärk. Näiteks kui katse eesmärk on uurida kaltsiumiioonide muutusi kardiomüotsüütides kodade virvenduse ilmnemisel, saab kindlaks teha, et uuritav aine on kaltsiumiioonid kardiomüotsüütides ja fluorestseeruvate sondide valikuvahemik on piiratud kaltsiumiioonide sondid, mis suudavad märgistada elusrakke. Nõel.
2. Määrake saadaolevate fluorestsentssondide vahemik
Uute katseainete või indikaatorite puhul, kui katse eesmärk ei ole uute fluorestseeruvate sondide uurimine, võite valida küpsete sondide ja märgistamismeetodite kasutamise. Katsetavat ainet märgistavate fluorestsentssondide tüübi või vahemiku saab kindlaks teha, otsides autoriteetset kirjandust või kodu- ja välismaal tuntud reaktiivitootjate tootekatalooge.
3. Uurige, kas fluorestseeruva sondi omadused vastavad fluorestsentsproovide ettevalmistamise nõuetele
Fluorestseeruvate sondide omadused mõjutavad otseselt proovide märgistamist ja katsetulemusi. Seetõttu on enne fluorestsentssondide valimist ja proovide märgistamist katses vaja täielikult mõista nende fluorestsentsomadusi. Uuritavate fluorestsentssondide omadused on järgmised:
1. Valgussondide ja proovide reaktsioonikarakteristikud
2. Fluorestseeruvate sondide tundlikkus ja fluorestsentsi intensiivsus
3. Fluorestsentssondidega märgistatud proovide spektraalsed omadused
4. Fluorestsentsi stabiilsus
5. Proovi mitmekordse fluorestsentsi vastastikmõju
