Konfokaalse mikroskoobi ja tavalise optilise mikroskoobi võrdlus
Mikroskoop on peamine tööriist rakkude vaatlemiseks. Sõltuvalt valgusallikast võib selle jagada kahte kategooriasse: optiline mikroskoop ja elektronmikroskoop. Esimene kasutab valgusallikana nähtavat valgust (ultraviolettmikroskoop kuni ultraviolettvalgus), teine aga kasutab valgusallikana elektronkiirt. Tavaline optiline mikroskoop ja laserkonfokaalne mikroskoop kuuluvad samasse optilisse mikroskoobi.
I. Üldine optiline mikroskoop
Tavaline bioloogiline mikroskoop koosneb kolmest osast, nimelt: ① valgustussüsteem, sealhulgas valgusallikas ja kondensaator; ② optiline suurendussüsteem, mis koosneb objektiividest ja okulaaridest, on mikroskoobi põhiosa, et kõrvaldada sfääriline aberratsioon ja kromaatiline aberratsioon, okulaarid ja objektiivid koosnevad keerukast läätserühmast; ③ mehaaniline seade, mida kasutatakse materjali kinnitamiseks ja mugavuse jälgimiseks.
Mikroskoobi objekt on selge, ei määra mitte ainult suurendus, vaid ka mikroskoobi lahutusvõime (eraldusvõime), lahutusvõime viitab mikroskoobile (või inimsilm sihtmärgist 25 cm kaugusel) suudab objekti eristada väikeste intervallidega. Lahutusvõime suuruse eristamine määratakse valguse lainepikkuse ja peegli suu sageduse ning keskkonna murdumisnäitaja järgi, mis on väljendatud valemis:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 kus: n=keskkonna murdumisnäitaja;=peegli suu nurk (pingenurga objektiiviläätse suudme näidis), NA=peegli suu nurk (arvuline ava). Peegli suu nurk peab alati olema väiksem kui 180?, seega on sina/2 zui väärtus tingimata väiksem kui 1.
Optiliste läätsede tootmisel kasutatava klaasi murdumisnäitaja on 1,65 ~ 1,78, kasutatava kandja murdumisnäitaja, mida klaasile lähemal, seda parem. Kuiva objektiiviläätse puhul on õhu keskmine peegli suu sagedus tavaliselt 0.05 ~ 0,95; õlilääts, mille keskmiseks on seedriõli, peegli suu määr võib olla 1,5 lähedal.
Tavaline valguse lainepikkus on 400~700 nm, nii et mikroskoobi eraldusvõime väärtus ei ole väiksem kui 0,2 μm, inimsilma lahutusvõime on 0,2 mm, seega on mikroskoobi zui suurenduse üldine disain on tavaliselt 1000X.
Teiseks laserkonfokaalne skaneeriv mikroskoop
Laserkonfokaalne skaneeriv mikroskoop (laserkonfokaalne skaneeriv mikroskoop), laseriga skaneeriva valgusallikana, punkt punkti haaval, joone haaval, pind pinna haaval kiirskaneeriv kujutis, skaneeriv laser ja ühise objektiivi fluorestsentskollektsioon, objektiivi skaneeriva laseri teravustamispunkt , aga ka objektipunkti hetkepildistamine. Laserkiire lühema lainepikkuse tõttu on kiir väga peen, seega on konfokaalse laserskaneeriva mikroskoobi eraldusvõime kõrge, umbes 3 korda suurem kui tavalisel optilisel mikroskoobil. Süsteem fokusseeritakse üks kord ja skaneerimine piirdub proovi ühe tasapinnaga. Kui teravustamissügavus ei ole sama, saab proovi erineva sügavustasemega pilte saada ja see pilditeave salvestatakse arvutisse, arvutianalüüsi ja simulatsiooni abil saab see näidata rakuproovi kolmemõõtmelist struktuuri. .
