Multifotoonse laserskaneeriva mikroskoopia (MLSM) eelised ja puudused
Multifotoonne laserskaneeriv mikroskoopia on laserskaneeriva mikroskoopia tehnoloogial põhinev eksperimentaalne meetod, mis tagab parema optilise läbilõikamise võimaluse kolmemõõtmeliseks vaatluseks. Mitme fotoni fluorestsentsi ergastusmeetodil kasutatakse proovide kõrge eraldusvõimega fluorestsentskujutiste kogumiseks pika lainepikkusega punast valgust või infrapuna-lähedast valgust, mis kahjustab elavaid isendeid minimaalselt. Seetõttu sobib see elusrakkude pildistamiseks, eriti paksude eluskudede, nagu ajulõigud, embrüod jne pildistamiseks. Tervete elundite või isegi tervete kehade pildistamine.
Eelised on järgmised:
1. Ergastamiseks kasutage punast valgust või infrapunavalgust ja valguse hajumine on väike (väikeste osakeste hajumine on pöördvõrdeline lainepikkuse neljanda astmega).
2. Nõelauku pole vaja ja pildistamise ristlõikest saab koguda rohkem hajutatud footoneid.
3. Nõelauk ei suuda eristada hajutatud footoneid, mis eralduvad defokuseeritud piirkonnast või fookusalast ning sügavates kihtides mitme fotoni pildistamise signaali-müra suhe on hea.
4. Ühe footoni ergastamiseks kasutatav ultraviolett- või nähtav valgus neeldub ja nõrgeneb proovis kergesti enne, kui kiir jõuab fookustasandini ning sügavaid kihte on raske ergastada.
5. Bioloogilise mikroskoobiga vaatlemisel on esmatähtis mitte kahjustada organismi enda aktiivset seisundit ning säilitada veevoolu, ioonide kontsentratsiooni, hapniku ja toitainete voolu. Valgusvaatluse puhul peab nii soojus- kui footonienergia jääma kiiritushulga ja valgusenergia piiresse, et rakud ei kahjustataks.
6. Mitmefotonmikroskoopial on ka palju eeliseid. Näiteks kolmemõõtmelise eraldusvõime, sügavuse läbitungimise, hajumise efektiivsuse, taustvalguse, signaali-müra suhte, juhtimise jms osas on transtsendentsed omadused, mida varasematel lasermikroskoopidel ei olnud või mis ei suutnud võrrelda.
Mitme fotoni konfokaalne laserskaneeriv mikroskoopia on laienenud erinevatesse uurimis- ja rakendusvaldkondadesse. See võib teostada proovide kolmemõõtmelist mittepurustavat vaatlust nende loomulikus olekus ning parandada süsteemi eraldusvõimet ja signaali-müra suhet. Mitme fotoni ergutusmaterjalide kasutamine Omaduste muutused võivad realiseerida ka kolmemõõtmelise kõrgusandmete salvestamise ja kolmemõõtmelise mikrotöötluse mis tahes suunas, millel on kõrge rakendusväärtus. Usutakse, et mitme fotoni konfokaalse mikroskoopiaga seotud masinate, materjalide, lasertehnoloogia jms edasiarendamisel saab rohkem fotoonilise konfokaalse laserskaneeriva mikroskoopia arengut ja laiemat rakendust.
Puudused on järgmised:
1. See suudab pildistada ainult fluorestsentsi.
2. Kui proov sisaldab kromofoore, mis võivad neelata ergastavat valgust, näiteks pigmente, võib proov kuumuse tõttu kahjustada saada.
3. Eraldusvõimet on veidi vähendatud. Kuigi seda saab parandada, kasutades samaaegselt konfokaalseid auke, on signaali kadu.
4. Piiratud kallite ülikiirete laserite tõttu on mitmefotoni skaneerivate mikroskoopide hind suhteliselt kõrge.
